针式滤器（有机溶液或气体过滤除菌专用，无菌）

细胞培养注意事项（入门级）

，高压灭菌之后，再去内毒素。去内毒素方法很多，最简单可以放在烘箱180度3小时。或者过去内毒素的柱子后，高压灭菌。第二，各种溶液灭菌：抗生素用去内毒素水配制后，直接过滤除菌（过0.22u滤头）。可以用一次性无菌注射器过一次性0.22u滤头。现在用的培养液，如果是商业化液体培养基，不用处理。如果是粉末，需要用去内毒素水在生物安全柜（或超净工作台）进行配制，再过滤除菌。可以先配浓缩液（如10×），过滤除菌后。再用灭菌去内毒素水稀释成1×培养液。第三，完全培养液的配制：培养液加上合适比例的血清即可。但血清

细胞培养从头学——入门篇

型胶原酶分子颗粒比胰酶大，不容易过滤，因此可以用蔡式滤器过滤除菌。分装入10ml小瓶-20℃保存。 （十一）明胶溶液 因为明胶难于过滤，所以配制0.1%明胶溶液必须用无菌的PBS配制。所以制备过程中必须要注意无菌操作。首要的问题是如何无菌准确称量0.1克（配成100ml溶液）-即解决无菌分装药品的问题。其次要注意即使是0.1的溶液，明胶也难溶，因此要充分摇匀，过夜放置，然后无菌分装入50ml小瓶中， 4℃保存。 （十二）其他培养用液的配制： 20ug/ml

滤器相关问题

移液器吸取。 另外，SIGMA公司和其他公司的细胞培养专用DMSO，是经过除菌的，可以直接使用。 丁香园网友jjyyll的观点为：一般细胞培养的用液均需要无菌处理，DMSO或者无水乙醇或水溶解后加入培养的细胞用液更需要如此，不过DMSO是有机溶剂用一般的针头滤器就会将滤膜融解，如：要过滤DMSO溶解的DTZ，需要使用耐DMSO的Nylon材料滤膜（摘自生物谷）但如果是只作简单的验证或测量鉴定，也可以考虑不过滤而直接使用，因为不会大批量的细胞污染，相关资料也可以从生物谷中查找 4.33