Oxoid 支原体琼脂CM0401B 支原体肉汤CM0403

Oxoid 支原体琼脂CM0401B 支原体肉汤CM0403B 支原体添加剂SR0059C SR0060C

品牌：Oxoid
产地：英国
产品：用于选择性分离培养支原体
支原体琼脂基础  CM0401B
支原体肉汤基础  CM0403B，新货号CM1166B
支原体添加剂G  SR0059C
支原体添加剂P  SR0060G

支原体琼脂（Mycoplasma Agar）

用于选择性分离支原体

货号	产品描述	规格	可配制培养基
CM0401B	支原体琼脂基础 Mycoplasma Agar Base	500g	14.1L
SR0059C	支原体添加剂G Mycoplasma Supplement G	10小瓶	每小瓶80ml

支原体琼脂基础 CM0401

配方表：

成分*	含量 g/L
细菌学蛋白胨	10.0
牛肉浸粉（Lab-Lemco粉）	10.0
氯化钠	5.0
矿物质	0.5
琼脂	10.0
pH 7.8±0.2 @25℃

*可根据标准需要自行调整

 

支原体添加剂G SR0059C

配方表：

成分	每小瓶含量	每升培养基含量
马血清	20.0ml	200.0ml
酵母粉(25% w/v)	10.0ml	100.0ml
乙酸亚ta	25.0mg	250.0mg
青霉素	20000IU	200000IU

配制方法：

取35.5g的CM0401培养基到1L蒸馏水中，加热溶解，分装培养基，每瓶80ml，121℃灭菌15分钟，冷却到50℃，每瓶培养基加入1瓶已安装说明书溶解的SR0059C。

肺炎支原体双向培养基（Mycoplasma pneumoniae Bi-phasic Mediu

用于选择性分离肺炎支原体

货号	产品描述	规格	可配制培养基
CM0401B	支原体琼脂基础 Mycoplasma Agar Base	500g	14.1L
SR0060C	支原体添加剂P Mycoplasma Supplement P 每瓶溶解至20ml，可配成10份的双向培养基	10小瓶	每小瓶配10份

支原体添加剂P SR0060C

配方表：

成分	含量
马血清	6.0ml
酵母粉(25% w/v)	3.0ml
乙酸亚ta	0.008g
葡萄糖	0.3
酚红	0.0012g
氯化亚甲基蓝	0.0003g
青霉素	12000IU
支原体肉汤基础CM0403	0.145g

配制方法：

往每瓶SR0060C中加入20ml无菌蒸馏水，混匀溶解。往10个小瓶中每个加入1ml的支原体琼脂基础，121℃灭菌15分钟。在上述10小瓶培养基中分别加入2ml溶解后的支原体添加剂P，即SR0060C。 

产品描述：

Oxoid支原体琼脂基础是一种基础培养基，加入合适的添加剂后，可以用来培养支原体。

Edward强调过在基础培养基中加入有毒物质的重要性，Lynn & Morton对加入琼脂培养基中的抑制剂也给予了特殊的重视。Oxoid的支原体培养基基础不用含有有毒物质和抑制剂，可以选择性地添加它们，同时它含有的矿物质优化了菌落的生长性能，同时也不会干扰培养基的澄清度。

Hayflick建议在培养基中加入10% v/v的25% w/v的面包酵母提取物，Lemcke则用Oxoid酵母粉LP0021加入。大部分的支原体需要富含血清的培养基，常用的是马血清(20% v/v)，猪或人血清可以替代马血清，但是人血清里面的抗体和抗生素会对培养基产生重要的影响。Edward建议将DNA加入培养基可以促进牛支原体和其他支原体的生长，在每升培养基中加入20mg脱氧核糖核酸钠（引述自Lemcke）。

为了阻止污染微生物阻碍生长较慢的支原体的生长，抗菌物质必须加入到培养基中。青霉素和乙酸亚ta是最常用的试剂，但是T-strain支原体对乙酸亚ta敏感。Hutchinson和 Fallon 报道说在培养基中加入1mg/ml的氨苄西林可以替代青霉素和乙酸亚ta。青霉素的添加量应该在50-500 units/ml，乙酸亚ta的添加量应该在1/2000到1/8000之间。如果要做T-Strain支原体的研究，就去除乙酸亚ta。

两种添加剂，支原体添加剂G SR0059和支原体添加剂P SR0060，可以优化支原体的生长情况。支原体添加剂G SR0059是一种一般的添加剂，由Hayflick的配方而来， 当加入到Oxoid支原体肉汤基础或者支原体琼脂基础后，就组成完全选择性培养基，促进需要甾醇的支原体的生长。

支原体添加剂P是一种液体添加剂，由Mycoplasma Reference Laboratory, CPHLS, Colindale报道的配方而来，与Oxoid支原体琼脂基础一起使用，组成双向培养基，用来分离和初步鉴定肺炎支原体。

许多种的支原体是需氧菌或兼性厌氧菌，但有些支原体喜欢微需氧条件（通过加入二氧化碳），或者喜欢严格厌氧。

致病性支原体菌株在35℃下生长最好，腐生菌株经常在22-30℃下生长，T-支原体的最佳生长温度是36℃.支原体属在pH 7.4-8.0生长最好，但是T-支原体最适在pH 6.0-6.5.

技术要点：

琼脂平板

使用Oxoid的支原体琼脂基础CM0041和添加剂SR0059制备好支原体琼脂平板（常用55mm平板）以培养样品。平板可在湿润的需氧环境，厌氧环境和 10% CO₂-90% N₂环境中培养。在培养7天后，用60倍的显微镜查看琼脂表面，并使用倾斜透射光。菌落特制是菌落表面中心会陷入，给人一种“煎鸡蛋”的外观形态。在进行鉴定之前有必要使用再培养对菌株进行纯化。

双向培养基

双向培养基由1ml的支原体琼脂基础和2ml 支原体添加剂P组成，双向培养基瓶可以与拭子或一小片痰一起35℃下培养最多3个月，任何由于真菌或者细菌的生长导致浑浊的培养基都必须被丢弃。

肺炎支原体的生长会发酵葡萄糖产酸，使亚甲基蓝还原，并且使酚红指示剂变黄色。出现这种颜色变化的培养基需要在琼脂培养基上进一步培养，可以用CM0401加SR0059C。

注意事项：

必须采取有效措施预防乙酸亚ta中毒；
不要使用醋酸ta培养基分离解脲支原体；
以下情况下可确证是否为支原体结果：
(1) 具有典型的形态
(2) 无血清介质中无菌落生长
(3) 菌落嵌入琼脂表面

支原体肉汤（Mycoplasma Broth）

用于从临床样本种选择性分离培养支原体

货号	产品描述	规格	可配制培养基
CM0403B CM1166B	支原体肉汤基础 Mycoplasma Broth Base	500g	19.6L
SR0059C	支原体添加剂G Mycoplasma Supplement G	10小瓶	每小瓶80ml

支原体肉汤基础 CM0403，新货号CM1166

配方表：

成分*	含量 g/L
细菌学蛋白胨	10.0
牛肉浸粉（Lab-Lemco粉）	10.0
氯化钠	5.0
矿物质	0.5
pH 7.8±0.2 @25℃

 *可根据标准需要自行调整

 

配制方法：

取25.5g的CM0403培养基到1L蒸馏水中，混匀溶解，分装培养基，每瓶80ml，121℃灭菌15分钟，冷却到50℃，每瓶培养基加入1瓶已安装说明书溶解的SR0059C。

注意事项：

乙酸亚ta有毒，必须采取有效措施预防中毒。

当肉汤中的指示剂发生颜色变化时，要立刻转移到琼脂上培养，以防pH的变化损害微生物。