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99
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北京诺博莱德科技有限公司
Oxoid 洋葱伯克霍尔德菌琼脂基础CM0995B,选择性添加剂SR0189E
品牌:Oxoid
产地:英国
货号:CM0995B,SR0189E
用于分离洋葱伯克霍尔德菌的选择性培养基
洋葱伯克霍尔德菌( burkholderia cepacia )曾名为洋葱假单胞菌(pseudomonas cepacia),因引起洋葱球茎腐烂而得名 ,1993 年改为现名,是一组基因型不同表型相近的复合物,是引起囊性纤维化(cystic fibrosis ,CF)的重要条件致病菌,也是医院感染的重要病原菌之一。该菌为不发酵糖革兰阴性杆菌,广泛存在于土壤及水中,在医院环境中常污染自来水、 体温计、 喷雾器、 血管导管、 导尿管、 静脉输液器等,因而可致多种医院内感染,包括败血症、 心内膜炎、 肺炎、 伤口感染、 脓肿、 眼结膜炎等,是条件致病菌。其细胞膜的不通透性使其对大多数抗生素产生耐药,在医院易引起暴发流行,其临床分离率在逐年增加,分离部位也在扩展,必须重视。
洋葱伯克霍尔德菌培养基(Burkholderia cepacia Medium)
用于分离洋葱博克霍尔德菌的选择性培养基,可从囊性纤维化患者的呼吸道分泌物中分离出洋葱伯克霍尔德菌,也可作为非无菌的含有防腐剂的无机盐溶液的常规检测方法。
|
货号 |
产品描述 |
规格 |
可配制培养基 |
|
CM0995B |
洋葱伯克霍尔德菌琼脂基础 |
500g |
13.7L |
|
SR0189E |
洋葱伯克霍尔德菌选择性添加剂 |
10小瓶 |
每小瓶500ml |
洋葱伯克霍尔德菌琼脂基础 CM0995:
配方表:
|
成分* |
含量 |
|
蛋白胨 |
5.0 |
|
酵母粉 |
4.0 |
|
丙tong酸钠 |
7.0 |
|
磷酸二氢钾 |
4.4 |
|
磷酸氢二钠 |
1.4 |
|
胆盐 |
1.5 |
|
硫酸铵 |
1.0 |
|
硫酸镁 |
0.2 |
|
硫酸亚铁铵 |
0.01 |
|
酚红 |
0.02 |
|
结晶紫 |
0.001 |
|
琼脂 |
12.0 |
|
pH 6.2±0.2 @25℃ |
|
*可根据标准需要自行调整配方
洋葱伯克霍尔德菌选择性添加剂 SR0189E:
|
成分 |
每小瓶SR0189E含量 |
每升培养基含量 |
|
多粘菌素B |
7500IU |
150000IU |
|
庆大霉素 |
2.5mg |
5.0mg |
|
替卡西林 |
50.0mg |
100.0mg |
使用方法:
称取18.25g琼脂基础到500ml蒸馏水中,混匀,121℃灭菌15分钟,冷却到50℃,添加已经按照说明书溶解好的1瓶SR0189E,混匀倒平板。
产品描述:
洋葱伯克霍尔德菌Burkholderia cepacia是一种需氧细菌,氧化酶阳性,革兰氏阴性,经常在液体和潮湿环境中发现。Oxoid的洋葱伯克霍尔德菌培养基由Gilligan等人发明的PC培养基改良而来,与在麦康凯琼脂上培养48小时相比,改培养基上洋葱伯克霍尔德菌表现出更好的生长情况。
技术要点:
取出一个常规的呼吸道样品,比如从病人的痰液,长的咽喉拭子,或者支气管灌洗液中获得。稀释样品,如果可以的话在林格氏液中稀释,配成1:2的溶液,涂布在博克霍尔德菌培养基上,37℃培养48至72小时。
48小时后查看灰绿色菌落,培养基从草绿色变为鲜艳的粉红色,所有的菌落都需要进一步鉴定,如果需要的话继续培养24小时。典型的洋葱伯克霍尔德菌的菌落是circular and entire,颜色的形成是由于色素的产生,当培养基从橙色变为明亮的粉红色时,菌落从灰色变为草绿色
质控:
阳性对照:Burkholderia cepacia ATCC® 25608 生长良好,在亮粉红色的培养基上呈灰色菌落,低数量的菌落不会使培养基变色
Burkholderia cepacia ATCC® 25416 生长良好,在亮粉红色的培养基上呈草绿色菌落,低数量的菌落不会使培养基变色
阴性对照:Pseudomonas aeruginosa ATCC® 27853 抑制
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文献和实验e. pRFHM1 + pJK101 (抑制的阳性对照) f. pJK101 单独(抑制的阴性对照) 3. 将每种转化混合物铺在适宜的选择性缺陷板上: CM(Glu)-Ura-His (针对质粒组合 a~e )或 CM(Glu)-Ura (针对质粒组合 f )。将培养板在 37 ℃培养 2~3 天以选择含有质粒的转化酵母克隆。 4. 制备转化子的母板。 活化和抑制活性的鉴定: X-gal
和尿液等标本中的细菌计数。取纯培养物的稀释或原标本1ml至无菌培养皿内,再将已融化并冷却至45~50℃左右的琼脂培养基15~20ml倾注入该无菌培养皿内,混匀,待凝固后置37℃培养,长出菌落后进行菌落计数,以求出每毫升标本中所含菌数。先数6个方格(每格为1cm2)中菌落数,求出每格的平均菌落数,并算出平皿直径,然后按下列公式计数,求出每毫升标本中的细菌数。 全平板菌落数=每方格的平均菌落数×лr2 每ml标本中的细菌数=全平板菌落数×稀释倍数 6.涂布接种法 本法多用于纸片
。 (一) 克隆化方案 用克隆化的方法很多,而最常用就是有限稀释和软琼脂平板法。 1. 有限稀释法的程序 ① 制备饲养细胞悬液(同融合前准备) ② 阳性孔细胞的计数,并调细胞数在1~5×103/ml ③ 取130个细胞放入6.5ml含饲养细胞完全培养液,即20个细胞/ml,100μl/孔加A、B、C三排为每孔2个细胞。余下2.9ml细胞悬液补加2.9ml含饲养细胞的完全培养液,细胞数为10个/ml,100μl/孔加D、E、F三排,为每孔1个细胞。余下2.2
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