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样
产品货号:XF-SC0198
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文献和实验色,或核呈分叶状,边集的Hoechst着色的为调亡细胞。我最近在作的试验就是用的这种方法,附上一张我染的PC12细胞的图片,请大家指教。更精确的定量可以通过流式细胞仪来检测。用PI和Hoechst33342双标鉴别调亡、坏死,这种方法简便易行,结果比较可靠。 2、PI和Calcein-Am双标: Calcein-AM 是一种绿色荧光标记物,可显示胞浆,为膜通透性的荧光染料。Calcein-AM 一旦进入胞内,便可被内源性酯酶水解成绿色荧光物质calcein, 并保留在胞浆中。细胞
为1ug/ml,37度水浴10分钟,置冰上冷却,离心弃染液,用PBS重悬,加入PI染液,使其终浓度为5ug/ml,置冰上冷却染色30分钟离心去染液,用PBS洗一次,即可以上流式了. 由于Hoechst很容易穿透胞膜,没有死亡的细胞也能够穿入,因此固定对它穿膜没有影响; 但PI通常只能通过凋亡晚期和死亡的细胞膜,我也不知道固定对PI染色有无影响,反正我做的Hoechst和PI双标我没固定. zdwyzhy:我用的是Hoechst33342,本来我单位的流式是三通道,但只有红、绿和橙色滤光片,双标
二次,PI工作液5ul,避光30分钟后上流式。 5、CFSE,PI双阳性的细胞为被杀伤的靶细胞,除以靶细胞总数,即为杀伤率。 注意事项 1、CFSE及PI的浓度必须注意,宁低勿高,个人感觉,如果标高的话,在4度放一晚好像会好一些。 2、必须设全阴,CFSE单标,PI单标,CFSE+PI双标并同步化的靶细胞的参照。 3、作用时间不能太长,不要超过8个小时。
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