重组蛋白A-Cys， His-tag（耐碱）

对比 Strep-tag 与 His-tag 系统异同点？

质，小分子或是金属。当融合有亲和标签的蛋白通过标签-配体作用结合再层析基质上时，通过洗杂步骤，即可去除掉其他的细胞成分。 为了洗脱所需要的蛋白质，通过改变缓冲液的条件，如pH，或通过竞争亲和标签和配体连接的方法来进行。 但怎样的纯化是较为成功的呢？仅达到所需的质量量级，如毫克级（或克级）即可满足吗？ 这些并不简单。质在蛋白纯化中同样尤为重要，比如，就蛋白的生物活性和纯度而言，通常会有所要求。   以下我们来讨论并且比较2种技术： His-tag系统和Strep-tag®系统，都使用了亲和层析法来纯化

His-Tag重组蛋白亲和层析标准操作规程（SOP）

缓缓加入柱内，尽量避免气泡的产生。打开开关，保持尽量较低的流速（1 mL/min），待吸光值大于20时，用50 ml 离心管接流出的蛋白溶液，称流穿。流穿内的蛋白应为未与凝胶结合的菌体蛋白。 5. 洗涤 沿壁缓缓加入结合缓冲液，打开开关，走大于10柱体积的结合缓冲液，流速3 mL/min。使吸光值恢复到基线或接近于基线水平。 6. 洗脱 初次纯化一个新的重组蛋白一般选择40 mM、60 mM、80 mM 咪唑作为流洗浓度，主要洗脱非特异结合在凝胶中的菌体蛋白，100 mM

PEAS Labeling Gcn4-cys

PEAS Labeling Gcn4-cys James Fishburn, Hahn Lab March 2006 Notes 10 mCi 125I = 4.6 nmol (see spec. sheet for calculation) 4.6 nmol Gcn4(1-118,209-281) = 103 microgram (M.W. 22,400) PEAS has low solubility in aqueous