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- gemig
- XF-S1389
- 2025年07月15日
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- 文献和实验
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50 pmol
产品规格：50 pmol
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文献和实验, Cas9 mediates cleavage of target DNA upstream of PAM to create a DSB within the protospacer. ( b ) Design of chimeric sgRNA for genome cleavage. The SpCas9 nuclease ( yellow ) binds to genomic DNAdirected by the sgRNA consisting of a 20-nt guide
40 个），在 Cas9 切开双链之后，模板的两臂同源序列直接互补（HDR，同源修复），从而完成了基因编辑。聪不聪明！上传一张自己的理解图4. Clonal isolation of cell lines 将已编辑的细胞分离开来这个很好理解，在编辑片段中加入抗生素抗性基因或者荧光基因后，可通过抗生素筛选或者 FACS 分离。5. Functional testing 功能验证（1）SURVEYOR nuclease assay（2）Detection of indels or HDR
已经成为体外基因组编辑的最流行系统，但体内的基因编辑方法仍然受到 Cas9 导入问题的限制。腺相关病毒载体（AAV）因免疫原性低而常用于基因的体内导入。不过，由于 AAV 只能容纳~4.5 kb，化脓链球菌（spCas9）和 gRNA（总共~4.2 kb）要包装到 AAV 载体中还是很有挑战性的。研究人员随后在 Cas9 的同源物中，找到了金黄色葡萄球菌的 Cas9（SaCas9），证明其在哺乳动物细胞中表现出切割活性。并且长度适合插入 AAV 载体中，效率与 SpCas9 相似，适合体内研究
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