磁珠法血清/血浆游离DNA提取试剂盒（预封装48T）

在无血清细胞培养条件下将人 iPS 细胞体外分化为结肠类器官

1-3 次，以解离细胞。小心不要引入任何气泡。 将解离的细胞收集在 15 mL 锥形管中。将 1 mL 单细胞传代培养基添加至孔中，收集剩余残留的细胞，并转移至含有细胞悬液的 15 mL 锥形管中。以 140 x g 离心5 分钟并吸出上清液。 将细胞沉淀重悬于 1 mL 单细胞传代培养基中。使用台盼蓝(T8154)和血细胞计数板计算活细胞总数。 将每孔 1x106 个细胞加入 ECM Gel (CC131-5ML)涂覆的 6 孔板中。使用的培养基为单细胞传代培养基（同步骤 1 ）； 总体

人细胞因子引物资料、EMSA等可索取

0.2 mM、PMSF 0.2mM、Leupeptin 0.2mM、Aprotinin 15mU/ml、和DTT 0.5mM]悬浮沉淀，裂解细胞核膜，置冰上40min，高速离心取上清，上清中含蛋白为细胞核蛋白。置-80℃冻存备用。用Bradford法行蛋白定量测定，标准品为牛血清蛋白。 DNA探针同位素标记：在灭菌Eppendorf管中加入如下试剂：2l 相应核转录因子特异性结合的双链DNA探针、1l T4 Polynucleotide Kinase 10× 缓冲液、1l [-32

细胞培养大攻略

分钟到60分钟不等。其中最常用的手法是56℃热处理30分钟。随着血清采集、处理、加工工艺的提高，许多早先认为是热灭活的原因已经不再成立，只有少数对血清进行热灭活的研究者在实验中证实了这一步骤的有效性和必要性。有人比较过11个不同细胞株，发现其中热灭活对6 个细胞株(HBAE，MDBK，Vero，成纤维细胞，MRC-5)的生长带来负面影响，三个细胞株(FOX-NY，MDCK和CHO-K1)不受热灭活的影响，而只有两个细胞株(Balb/3T3，Sp2/0Ag14 hybrid)，在热灭活之后，细胞