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48 T
产品规格:48 T
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文献和实验(经PI-SceⅠ和I-CeuⅠ预消化为线形DNA)连接。为了提高筛选效率,用SwaⅠ酶切连接产物以除去自身环化或者其他可能存在的非线性的腺病毒DNA(SwaⅠ酶切位点在环状Adeno-X病毒DNA的PI-SceⅠ和I-CeuⅠ位点之间)。用此DNA转化大肠杆菌DH5α并筛选重组子。最后,用重组腺病毒DNA转染HEK 293病毒包装细胞系。由于从Adeno-X病毒DNA中删除了E1基因,使其无法感染细胞,这一步需要用HEK 293包装细胞提供反式的E1蛋白,即可得到含有目的基因、有感染能力的重组腺病
的限制性酶切位点―PI-SceⅠ和I-CeuⅠ。Adeno-X病毒DNA也含有上述两个位点。只需把目的基因插入pShuttle的多克隆位点,然后用PI-SceⅠ和I -CeuⅠ消化载体,再将含有目的基因的pShuttle片段与Adeno-X病毒DNA(经PI-SceⅠ和I-CeuⅠ预消化为线形DNA)连接。为了提高筛选效率,用SwaⅠ酶切连接产物以除去自身环化或者其他可能存在的非线性的腺病毒DNA(SwaⅠ酶切位点在环状Adeno-X病毒DNA的PI-SceⅠ和I-CeuⅠ位点之间)。用此DNA转化
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