亚硫酸氢盐转化试剂盒（柱式法）

WB 样品粘稠像「鼻涕」怎么办？

脏蛋白提取得到蛋白质图谱[1]： 图 1：从小鼠脾脏和肝脏中使用不同方法提取总蛋白的蛋白图谱 条带 1 为柱式法提取的蛋白样品，条带 2 为 RIPA 可溶组分（RIPA 裂解后的上清），条带 3 为 RIPA 不可溶性组分（丢弃的沉淀部分）。实验发现 RIPA 的不可溶组分蛋白质图谱与可溶性组分图谱相似，但是不完全相同。 丢弃的不可溶组分中仍然可检测到许多蛋白条带，覆盖了整个蛋白质图谱分子量范围，不同样品的不可溶组分图谱也各不相同。丢失的蛋白会引起蛋白图谱发生变化，改变不同种类蛋白的比例，且具有

如何做好 WB 方案设计？你需要了解这些信息

，首先使用 Invent 柱式法胞质胞核分离试剂盒将样品分为胞浆蛋白和胞核蛋白，每组按照胞浆组分，胞核组分顺序分别上样，使用 GAPDH 作为胞浆内参，LaminA/C 作为胞核内参，验证胞质胞核分离成功无交叉污染。 检测目标蛋白 NF-ĸB p65，验证了过表达 circ-Sirt1 的血管平滑肌细胞（VSMCs）中，TNF-ɑ 诱导的 NF-ĸB p65 的核易位被显著抑制，并伴有促炎细胞因子和黏附分子表达减少（图 E）。相反，敲低内源性 circ-Sirt1 增强了 TNF-ɑ 诱导的 NF-ĸB

免疫荧光有结果 WB 却没条带？问题可能出在这一步…

。 图 1. 富集质膜组分后检测跨膜蛋白更易检出：目的蛋白 SGL1 是跨膜蛋白，使用总膜蛋白检测困难，使用柱式法质膜及细胞组分分离试剂盒富集质膜后再检测质膜组分，可以显著提高 SGL1 的检出效率。 （图片来源：Kashiwagi Y，2015，PLoS ONE 10(6)：e0130605. doi：10.1371/journal.pone.0130605.） （3）有条件诱导目的蛋白表达 如果通过增溶目的蛋白或分离亚细胞结构富集目的蛋白，仍无法得到 WB 条带，可通过查阅相关