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文献和实验%):如 OV-22 和 OV-25 等。 3、氟烷基聚硅氧烷类: 是中等极性固定液,给质子能力很强,对硝基化合物和酮类有显著的选择性保留,对芳烃和醇类则否。 比较常用的是 QF-1。 4、氰烷基聚硅氧烷类: 是极性较强的固定液,由于含有电负性的氰基,对极性组分有较强的定向力,对含芳香基和烯基化合物保留较强。 适合从复杂的烃类混合物中分离不饱和烃与芳烃,适合分离不饱和脂肪酸,适合分离糖类、醇类、酚类、甾体化合物和脂肪酸等。 比较常用的是 OV-225。 三
是对糖原、糖蛋白、微管、内质网和细胞基质等有较好的固定作用,对组织和细胞的穿透力比四氧化锇强,还能保存某些酶的活力,长时间的固定(几周甚至1~2个月)不会使组织变脆。缺点是不能保存脂肪,没有电子染色作用,对细胞膜的显示较差。 组织块固定常规采用戊二醛―锇酸双重固定法。分预固定和后固定,中间用磷酸缓冲液漂洗。前固定用2.5%戊二醛固定2小时以上、后固定用1%锇酸固定液固定1~2小时,pH7.2~7.4。固定完毕,用缓冲液漂洗30分钟后进行脱水。 三、脱水 为了保证包埋介质完全
点聚焦电泳产生pH梯度的方法有两种:一是用两种不同的pH缓冲液相互扩散,在混合区形成pH梯度,此为人工pH梯度。这种pH梯度不稳定,常用于制备电泳;另一种是利用载体两性电解质在电场作用下形成自然pH梯度。本实验就是利用载体两性电解质形成的自然pH梯度进行蛋白质样品等电焦聚电泳的。理想的载体两性电解质应该在其本身的等电点处有足够的缓冲能力和良好的导电性,且分子量要小,组成与被分析样品有所区别,对分析样品无变性作用或发生化学反应。常用的载体两性电解质是一系列脂肪族多氨基和多羧基类的混合物,即是一系
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