重组TEV蛋白酶（His-tag）

重组胰蛋白酶最适 PH 和 PH 稳定性

样品：重组胰蛋白酶，比活 4500USP u/mg pro.，上海雅心生物技术有限公司，纯度如图 1 所示。BAEE，Sigma. 图 1. 重组胰蛋白酶的纯度的 SDS-PAGE 鉴定 1. 最适 pH 的研究 准备 pH 为 3~12 的底物 BAEE（0.25 mM），分别测定 rPT 纯酶液的活性，最后结果表示为测定数值占最高酶活的百分比。缓冲液成分依次为 25 mM NaAc-HAc (pH 3~6)，25 mM Tris-HCl (pH 7~8)，25

重组胰蛋白酶最适温度和温度稳定性

样品：重组胰蛋白酶，比活 4000USP u/mg pro.，上海雅心生物技术有限公司，纯度如图 1 所示。BAEE，Sigma. 图 1. 重组胰蛋白酶的纯度的 SDS-PAGE 鉴定 1. 最适温度的研究 将底物 BAEE（0.25 mM）分别置于 4℃、15℃、20℃、25℃、30℃、40℃、50℃、60℃ 和 70℃ 水浴中温浴 20 min，加入相同体积的 RPT 酶液测定 rPT 的活力，结果表示为测定数值占最高酶活的百分比。 2. 温度稳定性的研究 取

His-Tag重组蛋白亲和层析标准操作规程（SOP）

缓缓加入柱内，尽量避免气泡的产生。打开开关，保持尽量较低的流速（1 mL/min），待吸光值大于20时，用50 ml 离心管接流出的蛋白溶液，称流穿。流穿内的蛋白应为未与凝胶结合的菌体蛋白。 5. 洗涤 沿壁缓缓加入结合缓冲液，打开开关，走大于10柱体积的结合缓冲液，流速3 mL/min。使吸光值恢复到基线或接近于基线水平。 6. 洗脱 初次纯化一个新的重组蛋白一般选择40 mM、60 mM、80 mM 咪唑作为流洗浓度，主要洗脱非特异结合在凝胶中的菌体蛋白，100 mM