封闭用正常兔血清（原液）

qPCR 实验中遇到这 3 个问题怎么办？

荧光定量 PCR 的常见异常结果除了扩增曲线异常、融解曲线异常两类常见情况外，qPCR 实验中通常还会遇到以下三大类情况： 1. 复孔间重复性差怎么办？ 复孔间重复性差一般会有以下两种情况： （1）CT 值很大，如 CT≥ 30，重复性差属于正常现象。该现象符合泊松分布，即在有效模板量很少的情况下，模板与引物的碰撞存在随机性，直接导致复孔间的 CT 值差异较大。 解决方法：如果融解曲线没有杂峰，无模板阴性对照同目的基因的 △CT 值为 3 or 5 以上，那 CT 值为准确的，可多设置

免疫双扩散检测抗GFP血清抗体

的右下角切掉一小块，作为标记。 4、GFP抗原的稀释：用上次实验得到的GFP粗提物的饱和硫酸铵沉淀，加100mL的PBS使溶解，此为抗原的原液。取出原液15mL，在一小块封口膜上用PBS做系列的倍比稀释，直到稀释为1：16。 5、在左边一朵花的中央孔中加约15mL的免疫后兔 血清 ，周围孔加不同稀释度的GFP粗提物。右边的一朵花除中央孔中加免疫前的兔血清外其余的与左边的相同。加样时将每孔加满即可，注意不要使溢出孔外。 6、在小塑料盒中铺一块

大肠杆菌感受态细胞的制备、重组DNA的转化、克隆筛选

质粒DNA十100µl感受态细胞悬液。(2) 将以上各样品轻轻摇匀，冰上放置20-30min，于42℃水浴中保温1－2min，然后迅速冰上冷却2min(3) 立即向上述管中分别加入0.4ml LB液体培养基（不需在冰上操作），使总体积到0.5ml，该溶液称为转化反应原液，摇匀后于37℃振荡培养约45-60min ，使受体菌恢复正常生长状态，并使转化体表达抗生素基因产物(Ampr)。3) 平板培养（有时需要稀释） (1) 取各样品培养液0.1ml，分别接种于含抗菌素LB平板培养基上，涂匀