一步法免染 PAGE 彩色凝胶超快速配制试剂盒（15%）

推荐：RNA快速提取一步法的建立

分析、蛋白质的体外翻译等均依赖于高纯度完整的RNA。 因此, 如何获得高质量的RNA是研究人员关注的问题。1987年Chomczynski等 ［1］ 建立了酸-异硫氰酸胍-苯酚-氯仿一步法（acid-guanidine-phenol-chloroform, AGPC）。该方法较以往的传统方法操作简单，无需特殊的设备，抽提时间缩短至4 h，因而得到广泛的应用。数家公司据此开发出RNA提取试剂盒 ［2，3］ 。使用试剂盒简单方便，但价格相对昂贵。为探索操作简便、经济实用、快速

一步法RT_PCR详细步骤（原创）

15－25℃ 中保存一年）11) 2℃-8℃ 冰冻离心机中离心 (7500 g/min)5 min 弃上清，12) 通风，室温中干燥 5 min-10 min，让乙醇挥发（根据肉眼观察管内水分情况，不能太干，RNA 干后难溶解）。13) 加入 30ul-50ul 的 0.1% 的 DEPC，吹打数次，14) 55－60℃ 孵育 10 min，冰上冷却，15) 供下一步实验使用或-70℃ 冻存。RNA 完整性的检测1) 制备琼脂糖凝胶，称取琼脂糖凝胶 0.34 g，加入 0.5×TBE

完整蛋白质从 SDS-PAGE 胶中的电洗脱及其 MALDI-TOF MS 分析

1. 前言 基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS) 已经被广泛应用于生 物科学中。结合十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE ) 和酶解消化，它提供了一种通过肽质量指纹谱（PMF ) 的快速、灵敏和准确鉴定蛋白质的方法通常 PMF 给出 10%~40% 的序列覆盖率。这样的覆盖率对于蛋白质鉴定来说已经足够，但它可能还不足以用来区分高度相似的蛋白质异构体。蛋白质异构体/同工酶广泛存在，它们通过 mRNA 的可变剪切或多基因家族生成。虽然它们在细胞中催化