多重探针法qPCR预混液（2x，含UDG，无ROX）

如何选择qPCR预混液

液为预先优化好的混合物，通常包含缓冲液、DNA聚合酶、dNTP、MgCl2及其他专利的添加剂。 一些专业人士坦言，对于多个指标，包括qPCR 效率、特异性、灵敏度、速度及耐受多个循环条件和样品类型，目前还尚未实现完美的平衡。大部分qPCR预混液能够在一些方面胜出，但很难是全部。如何选择最适合的那一个，小编下面给出了一些建议。 探针 还是染料? 当然，就多重分析而言，探针法是唯一选择。SYBR Green只适合单重反应。不过，SYBR Green的优势

Real-time qPCR 手册——手把手教你从菜鸟到高手

设置好，可以保存，修改反应程序或者立刻进行反应。 需要注意一点 ABI 仪器需要加 ROX 参比染料，默认的是 ROX。有些公司是把 ROX 或者其他染料配制在 MasteMix 里面；也有的是单独分开。要根据不同公司的 MasterMix 进行这一个步骤的选择。BioTeke 的 MasterMix 里没有参比染料，所以选择「none」。 设置好之后，就可以把配置好的 PCR 管放进仪器，点击 RUN！ 五、Real-time qPCR 数据分析 1. Real-time qPCR 常见参数

【分享】分享 QPCR 教程

。2.Mix配制一般来讲，进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引物终浓度为100-400mM；模板如果是总RNA一般是10ng-500，如果cDNA，通常情况下是1ul或者1ul的10倍稀释液，要根据目的基因的表达丰度进行调整。当然这些都是经验值，在操作过程中，还需要根据所用