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文献和实验一、仪器设备凝胶成像分析系统 ChemiGenius2。二、仪器结构见下图三、原理样品在电泳凝胶或者其他载体上的迁移率不一样,以标准品或者其他的替代标准品相比较就会对未知样品作一个定性分析。这个就是图像分析系统定性的基础。根据未知样品在图谱中的位置可以对其作定性分析,就可以确定它的成份和性质。样品对投射或者反射光有部分的吸收,从而照相所得到的图像上面的样品条带的光密度就会有差异。光密度于样品的浓度或者质量成线性关系。根据未知样品的光密度,通过于已知浓度的样品条带的光密度指相比较就可以得到未知
凝胶电泳是每个做分子生物学的研究者天天都要打交道的基本技术。电泳之后的信息处理与电泳本身同样重要。目前有大量软件可以用于分析电泳结果,最备受推崇的应该属 Biorad 公司的 1D 凝胶分析软件 Quantity One,其最大的优点是可以完全抛弃人为主观因素进行全自动定量,同时它的很多功能渗透了艰深的数理理论以及概率统计的原理。该软件的最新版本可以在 Bio-Rad 的官网免费下载,以供试用或用户升级之用。它的定量方式:首先,根据不同电泳条带的光密度值绘制光密度曲线,然后计算光密
迁移率发生改变。结合带通常较游离探针泳动率慢得多,形成滞后的电泳条带。其放射自显影的密度及面积即可反映活化易位至核内的核蛋白量。应用凝胶图像分析系统进行密度扫描,以扫描值作为核蛋白的活性水平。该法不仅简单迅速,而且灵敏度高,而它的另一特点是可以利用竞争性抑制试验来评价蛋白与DNA结合的特异性。但是EMSA操作相当复杂,整个过程包括丁核蛋白的抽提、定量,探针的标记与纯化,探针与蛋白质的结合,电泳与显影等。一般认为,EMSA成败的关键在于探针的标记,标记探针的放射性强度最好>15X10;Bq~1。应用磷屏
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