熊猫脾脏组织淋巴细胞分离液KIT

用 CD3/CD28 做好 T 细胞激活与扩增

细胞筛网置于培养皿中，取小鼠脾脏放置于筛网中，加入 5ml 达优小鼠淋巴细胞分离液，对脾脏轻轻进行研磨（注：此步操作要快，避免分离液蒸发）； 2. 把悬有脾脏细胞的的分离液立即转移至 15ml 离心管中，随后在分离液上层轻轻覆盖 500-1000μl 的 RPMI1640 培养基（保持分离液与培养基分界明显）； 3. 室温，水平转子 800g 离心 30 分钟，设置离心机为缓升缓降； 4. 离心结束后吸出淋巴细胞层（白膜层），加入 10ml RPMI1640 洗涤一遍细胞，250g 离心 10

不同样本破碎和匀浆中常见问题及解决方案

中含有丰富的收缩蛋白和结缔组织，以及干扰 RNA 分离的胶原蛋白。 解决方案 1. 对于含有丰富的收缩蛋白和结缔组织，组织细胞密度低，其中 RNA 含量较少，可以适当增加材料的起始用量。 2. 务必要在低温冷冻条件下将组织彻底磨碎，并尽量尽快研磨成粉末状。 3. 用蛋白酶或含有苯酚的试剂处理样本。   内源性 RNase 含量高的组织如肾脏、肠、脾脏、胸腺以及胰腺 该类样本中 RNase 含量很高，提取过程中很容易发生 RNA 的降解。 解决方案 1. 尽量使用新鲜组织，采样不宜太大，尽可能缩短

酶联免疫斑点(ELISPOT) FAQ

细胞。   4． 从动物脾脏组织分离淋巴细胞应如何操作？ 答：取动物脾脏组织时，应注意取材的无菌操作。分离出脾脏组织，研磨后过200目筛网，保证所分离的细胞为单个细胞悬液。获得细胞悬液后应该使用相应的淋巴细胞分离液进一步分离单个核细胞。   5． 在ELISPOT板上，每孔我应该放置多少数目的淋巴细胞？ 答：在使用ConA，PHA等阳性刺激孔中，一般放置的淋巴细胞数为 104