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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名:
Helamock/LUC
- 库存:
10
- 供应商:
上海雅吉
- 品系:
细胞系
- 组织来源:
ATCC来源
- 物种来源:
人,大鼠,小鼠等物种
- 免疫类型:
详见説明
- 运输方式:
顺丰速运
- 年限:
理论无限传代
- 生长状态:
上皮
- 规格:
1×10^6cells/T25培养瓶
雅吉生物作为高科技生命科学和生物技术领域的领先企业,拥有建立完善的鉴定流程和种类齐全的细胞资源库。我们提供的细胞株经过严格的质量控制和鉴定,确保其在科研实验中的可靠性和稳定性。我们的细胞资源库广受国内重点实验室和科研人员的信赖和好评,是您发表高质量文章时的可靠选择。如有任何关于细胞储存或其他细胞技术的疑问,欢迎随时咨询我们。
转染了microRNA-mock基因的阴性对照细胞Hela-mock/LUC(带荧光素酶)价格细胞复苏后应立即置于适当的培养基中,培养基需经过严格的无菌处理和配方优化,确保细胞的健康生长。
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培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶,消毒后放到超净台内严格无菌操作,将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照保存(40x,100x,200x各一张),前三天照片是重要售后依据,不提供照片默认收到状态良好。

转染了microRNA-mock基因的阴性对照细胞Hela-mock/LUC(带荧光素酶)价格细胞培养步骤
a、细胞传代:如果未超过80%汇合度时,将瓶装的完全培养液收集至离心管中,留5ml完全培养基,放入37℃、5%CO2孵箱培养;如果细胞密度超80%,即可进行传代培养。
贴壁细胞传代步骤如下:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞,使之完全脱落后吸出,然后将悬液转移至15ml离心管中,在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例进行分瓶传代(两个T25瓶),补充新的完全培养基至5-8ml/瓶,然后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。
转染了microRNA-mock基因的阴性对照细胞Hela-mock/LUC(带荧光素酶)价格悬浮细胞传代步骤日下:
1、半换液法
半换液处理,竖着培养瓶在培养箱静置1小时左右,轻轻吸掉3ml左右培养基,然后补给3ml的完全培养基,如果培养基变色慢,可直接加500ul左右FBS,传代的时候可以直接补给5ml培养基 分两个培养瓶培养,一般这样传代3次左右可以离心传代一次,去掉死细胞。
2、离心换液法
如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中1000rpm,离心5min,弃去上清,补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

b、细胞冻存:
1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃T25培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心 5min;
3、 弃上清,沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液(货号:C7001),混匀后加入冻存管中。
4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可,如后期要将细胞转入液氮罐中,则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。
C、细胞复苏:
1、从液氮中取出细胞冻存管(注意佩戴防护面具),快速将其置入 37℃水浴中解冻, 直至冻存管中无结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁;
2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中,1000rpm离心5min;
3、弃上清,沉淀用5ml完全培养基重悬,接种至T25培养瓶,放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
4、第二天,换用新鲜完全培养基继续培养。
转染了microRNA-mock基因的阴性对照细胞Hela-mock/LUC(带荧光素酶)价格注意事项:有些细胞贴壁不牢,在运输过程中容易发生细胞脱落,这是正常现象。如脱离较多可将培养瓶所有培养液收集至离心管,1000rpm离心5min,收集上清作过渡培养(后期对比培养),沉淀加入胰酶1-2ml,轻轻吹打,重悬,消化1-2分钟后,加5ml完全培养基终止反应。再离心,弃上清,加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代(两个T25),补充新的完全培养基至5-8ml/瓶,后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。
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文献和实验-----------------------------------------------对,我是在表达高的细胞上再转的这个miRNA,有可能效果不明显,我现在在考虑换个细胞株试试,有结果就上来汇报一下. shilei5794749 这个问题我也很感兴趣,我们之前预测一个microRNA的靶基因,选microRNA低表达的细胞系用EGFP-N和dual-luc做。一个师姐是转染microRNA mimics后24小时靶基因mRNA和蛋白相对control升高,48小时mRNA和蛋白跟control一样;而另一个师姐做的结果是24小时mRNA和蛋白都降低
RNAi实验,采用shRNA表达载体较好,效应持续时间长,缺点的需要构建相关载体。效率上,根据具体细胞,实验情况,各有千秋。 38、问:我看资料说 荧光标记阴性对照可用于优化转染条件和评价转染效率,我想请问一下:阴性对照应该是与目的基因的序列无同源性的,那如何评价转染效率? 答:带荧光的siRNA,不考虑序列,转染进去细胞内即可出现荧光,故可用于优化转染条件和评估转染效率。而沉默效率则和siRNA序列相关。 39、问:请教下,我在NCBI里查到的目的基因
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