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- 文献和实验
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5
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96T
产品货号:XFM21564
产品规格:96T
储存条件:2-8℃
有效期:6个月
本产品仅供科研实验用,不做其他用途!
样品收集、处理及保存方法
以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中,不得使用叠-氮-钠做为防腐剂。
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2. 血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3. 细胞培养物上清或其它生物标本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
4. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免
反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
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文献和实验)、DNA和少量RNA组成。组蛋白有H1、H2A、H2B、H3、H4五种。DNA包装时,由各两个H2A、H2B、H3、H4组成一个八聚体核小体,每个八聚体可缠绕146 bpDNA(称为核心DNA)。H1联系相邻的核小体,有利于DNA更高级的包装。重复的核小体结构加上连接DNA,通过组蛋白及其他非组蛋白进一步地折叠、压缩,形成高度有序的染色质结构。 在细胞生命活动的选择性基因沉默或基因表达过程中,包裹于染色质中的基因组DNA序列一般不发生改变,但细胞核内的染色质结构可以发生高度动态变化,使一些特定
., 2010),是 DNA 双链断裂后最早发生的事件之一。目前对 H2B 磷酸化的研究还不够深入,但发现 H2B 磷酸化可促进凋亡相关的染色质浓缩、DNA 断裂和细胞死亡 (Füllgrabe et al., 2010)。 泛素化 所有组蛋白核心蛋白都可以被泛素化,但 H2A 和 H2B 是最常见的,也是细胞核中泛素化程度最高的 两种蛋白 (Cao et al., 2012)。组蛋白泛素化在 DNA 损伤反应中起核心作用。 在 DNA 双链断裂位点发现了组蛋白 H2A、H2B 和 H2AX 的单泛素
细胞凋亡事件发生时,会出现蛋白质和核酸分子结构的改变,形成新的表位。利用免疫学方法对这些表位进行鉴定,有助于判断样本中细胞凋亡事件的发生。 细胞凋亡的发生,是由于内源性核酸内切酶的激活,这种钙和镁依赖性核酸酶容易进入的核小体间区解开双链DNA,产生单/低聚核小体片段,而核小体本身由于DNA与组蛋白H1、H2A、H2B、H3和H4形成紧密复合物而不被核酸内切酶裂解。采用双抗体夹心酶免疫法,应用小鼠抗DNA和抗组蛋白的单克隆抗体,与核小体片段形成夹心结构,可特异性检测细胞溶解物中的单
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