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48T
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
Human血小板相关抗体IgM(PA-IgM)ELISA Kit
3. 样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
Human血小板相关抗体IgM(PA-IgM)ELISA Kit5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
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System(表位标签系统)最重要的是要有高亲和性和高特异性的单克隆抗体和有能够识别的标记(肽)组合。在PA Tag System中有大鼠IgG2a单克隆抗体NZ-1和PA tag(GVAMPGAEDDVV)。但原本NZ-1并不用于亲和标签系统。和现在常用的HA标签系统、Myc标签系统一样,NZ-1本来是为了检测出目的蛋白而使用的抗体(FLAG标签系统是例外,它已经开发出用于亲和标签系统的抗体)2,3,4,5)。而NZ-1原来的标记蛋白是人的平足蛋白,是与血小板凝集相关的单次跨膜型糖蛋白,在恶性肿瘤细胞中会大量
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