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48T
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
Human通用转录因子II F肽1(GTF2F1)ELISA Kit
3. 样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
Human通用转录因子II F肽1(GTF2F1)ELISA Kit5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
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文献和实验基因的结合时,这一点尤其明显。 第 3 步 - 选择抗体 非高度特异的靶标抗体可能会出现不可预见的结合并增加背景信号,从而增加检测低丰度或低稳定性相互作用的难度。您的抗体应该满足以下标准:靶标特异性: 抗体应与阳性/阴性对照细胞系、敲除细胞或经过 siRNA 处理的细胞中预期表达一致。 抗体应检测酶类特异活化剂和/或抑制剂处理后有相应表达。 应使用肽阵列或肽 ELISA 来验证修饰特异组蛋白抗体的特异性。 可接受的信噪比: 应使用同型对照评估信噪比。 如实时 PCR 分析所示
处理的细胞中预期表达一致。 抗体应检测酶类特异活化剂和/或抑制剂处理后有相应表达。 应使用肽阵列或肽 ELISA 来验证修饰特异组蛋白抗体的特异性。 可接受的信噪比: 应使用同型对照评估信噪比。 如实时 PCR 分析所示,已知靶标基因的富集度应至少达到 10 倍本底水平以上。 抗体的质量不是决定免疫沉淀结果的唯一因素;抗体的浓度也会对结果造成重大影响。如果抗体浓度相对染色质的量过高,其可能会使分析过度饱和,导致特异信号降低和/或背景增加。相反
有替代前者的趋势。由于ABS-ELISA较普通ELISA多用了两种试剂,增加了操作步骤,在临床检验中ABS-ELISA应用不多。科研项目中检测微量的成分如细胞因子常采用本法。晶美分装ELISA KIT采用的方法:1, TORCH及传染病试剂盒(间接法),见2.2.32, TORCH-IgM捕获法特色:包被抗体,标记抗原原理:3, 细胞因子试剂盒采用的方法路线(ABC-ELISA)原理产品特色:采用ABC法,灵敏度更高,特异性更强。生物素抗体和酶联物是浓缩的,使用前需用相应的缓冲液稀释。酶联物可以通用
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