HEK-293.2sus人胚肾细胞

背景介绍

HEK-293.2sus 是一种胚胎细胞系，于 2008 年从人类胚胎的肾脏中分离出来。ATCC CRL-1573(HEK293)细胞逐渐从贴壁依赖型生长模式适应于悬浮模式。

尽管早期的报道表明细胞含有来自病毒基因组左右两端的腺病毒5型DNA，但现在很清楚只有左端序列存在。Ad5插入片段被克隆和测序，并确定从nts 1到4344的共线片段整合到19号染色体(19q13.2)中。

HEK-293.2sus人胚肾细胞产品基本信息

细胞名称：HEK-293.2sus人胚肾细胞

种属来源：人

组织来源：胚胎的肾脏

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

培养基：DMEM+10%FBS+4mM L-谷氨酰胺+1%P/S

生长条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

传代方法：1:2至1:3，每周 3次

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

支原体检测：无

HEK-293.2sus人胚肾细胞培养操作

HEK-293.2sus人胚肾细胞复苏步骤

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL完全培养基，培养过夜)。第三天换液并检查细胞密度。

HEK-293.2sus人胚肾细胞传代步骤

如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加入0.25%Trypsin-0.02% EDTA消化液于培养瓶中(T25瓶1-2ml，T75瓶2-3ml)，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min(难消化的细胞可以适当延长消化时间)，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加3-4ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含6-8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

HEK-293.2sus人胚肾细胞冻存步骤

待HEK-293.2sus细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

培养注意事项

1. 收到HEK-293.2sus细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，干冰运输的细胞检查干冰是否完全挥发，细胞是否解冻，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。.观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置2-4h。

4. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

5. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

6.该HCHEK-293.2sus人细胞仅供科研使用。

7. 说备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议1：2传代 。

8. 注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。