- ￥1280
- gemig
- XFP40932
- 2025年07月07日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
5
- 规格：
96T
产品货号：XFP40932
产品规格：96T
储存条件：2-8℃
有效期：6个月
本产品仅供科研实验用，不做其他用途！
样品收集、处理及保存方法
以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中，不得使用叠-氮-钠做为防腐剂。
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
4. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免
反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
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文献和实验特异性的选择主要需要考虑四个方面：蛋白特异性、种属特异性、实验方法特异性、标记物的特异性。 （1）蛋白特异性 针对需要检测的蛋白查找抗体，几个细节要区分，重组表达的蛋白和内源性蛋白的检测，对抗体的要求是不一样的，注意查看抗体说明书的检测说明。如果重组蛋白不是全长表达，则需要注意抗体的免疫原区域是否在重组蛋白区域内。内源性蛋白最好能清楚其剪切与修饰的方式，特殊表型的蛋白需要进行序列比对，并结合抗体免疫原序列，查看交叉反应的情况。磷酸化蛋白检测需要确定具体位点，不同位点的磷酸化意味
反复剪切成1mm×1mm大小的组织块。并剪切好的组织小块均匀摆置于瓶底，组织块间距0.5cm。盖好瓶盖，轻轻翻转培养瓶，让瓶底朝上并向瓶内注入适量培养液，于37℃孵箱内放置2~4h使组织块干涸并与瓶壁贴附后，将培养瓶慢慢翻转平放，使组织块完全浸入培养液中，继续静置培养3~5d。待有细胞从组织块周围游出后换液。1.1.4 原代培养动脉VSMC的传代培养 当大部分组织块长出细胞晕，并与相邻细胞的细胞晕接触时即可传代。加入配制好的消化液使其恰好覆盖细胞表面，室温下大约1~2min，倒置显微镜下见细胞质回缩
。 2、免疫组化实验中常用的抗体：单克隆抗体和多克隆抗体。 • 单克隆抗体：是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体，是应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备的。 – 特异性强、抗体产量高。 • 多克隆抗体：是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动物血中所获得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。 – 特异性低，会产生抗体的交叉反应。 – 多克隆抗体广泛应用于石蜡包埋组织切片，可减少假阴性染色机会。 – 抗原与抗体的结合，要求量保持一定比例，当抗原或抗体过量时，是不能聚
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