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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
5
- 规格:
96T
产品货号:XFP40682
产品规格:96T
储存条件:2-8℃
有效期:6个月
本产品仅供科研实验用,不做其他用途!
样品收集、处理及保存方法
以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中,不得使用叠-氮-钠做为防腐剂。
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2. 血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3. 细胞培养物上清或其它生物标本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
4. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免
反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
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文献和实验体P450酶较为复杂,而人肝微粒体中参与药物代谢的P450酶相对比较简单,主要有CYP1A、CYP2C、CYP2D、CYP2E和CYP3A,其组成见图1。 图1 人肝内P450酶的组成 目前,CYP450的酶表型鉴定主要使用以下3种方法:选择性抑制法、重组人源CYP450同工酶法、相关性分析法。选择性抑制法又分为化学抑制法和抗体抑制法,即在加入和不加入一系类CYP450酶亚型选择性化学抑制剂或抗体的条件下,分别测定人肝微粒体对药物的代谢活性,以考察人肝微粒体中CYP450酶亚型倍选择性抑制后,药物
代谢的 P450 酶相对比较简单,主要有 CYP1A、CYP2C、CYP2D、CYP2E 和 CYP3A,其组成见图 2。图 2 人肝内 P450 酶的组成目前,CYP450 的酶表型鉴定主要使用以下 3 种方法:选择性抑制法、重组人源 CYP450 同工酶法、相关性分析法。选择性抑制法又分为化学抑制法和抗体抑制法,即在加入和不加入一系类 CYP450 酶亚型选择性化学抑制剂或抗体的条件下,分别测定人肝微粒体对药物的代谢活性,以考察人肝微粒体中 CYP450 酶亚型倍选择性抑制后,药物的代谢是否受到影响
0.5 mol/L NaCl。 ( 5 ) 4-氯-1- 萘酚(Bio- Rad,Hercules,CA ) ( 保存于 -20°C )。 ( 6 ) 牛胰核糖核酸酶 B ( Sigma Aldrich) ( 保存于 2~8°C) 。 ( 7 ) 甲基比喃甘露糖苷(Sigma Aldrich ) ( 室温保存)。 ( 8 ) 牛晶状体 α-A-晶体蛋白(Sigma Aldrich) ( 保存于 -70°C ) 。 ( 9 ) 卵清白蛋白(Sigma Aldrich
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