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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
5
- 规格:
96T
产品货号:XFP40610
产品规格:96T
储存条件:2-8℃
有效期:6个月
本产品仅供科研实验用,不做其他用途!
样品收集、处理及保存方法
以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中,不得使用叠-氮-钠做为防腐剂。
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2. 血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3. 细胞培养物上清或其它生物标本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
4. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免
反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
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文献和实验一般为3~4次,有时甚至需洗5~6次。在ELISA中除了包被外,一般需进行45加样。其中“45加样”是什么意思?这里的45加样,应当为45度加样,即加样枪的吸头所在的直线应当与板条所在的直线呈45度角。ELISA中加样须注意如下问题:1. 吸取样品时,加样枪吸头不应黏附多余的液体;加样时不可90度向孔中滴加液体,这样会导致液体残留在吸头上,加样不准确!2. 不要将吸头伸入孔中,一方面若接触孔底可能压弯吸头,另一方面可能会将孔中的液体吹起来,加样不准确!正确的加样方法应为45度,吸头贴着孔壁加入
抗原和抗体的来源,索要试剂盒说明书,然后利用网络确认这些信息,正规的ELISA生产商,这些信息都是非常齐全,如果信息不全,则该ELISA的制造水平和质量都会很差。造假三:某些奸商为了夸大其生产ELISA涵盖的指标的范围,用一种指标来冒充其它指标,造成各种种属、各种指标都可以做的假象。比如用TGFβ这样的指标代替大多数试剂盒的其他指标作为检测抗体,同样可以获得良好的标准曲线。因为TGFβ在大多数哺乳类动物中(人、大鼠、小鼠、猪、牛……)都有广泛表达,种属间抗原的氨基酸序列同源性达100%,TGF
产生假阳性反应。一般说来,在 3 天内测定的血清标本可放置于 4℃,超过一周测定的需低温冰存。冻结血清融解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀宜轻缓,避免气泡,可上下颠倒混和,不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤,澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落,所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作,也可加入适当防腐剂。 2. 试剂的准备 按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。 ELISA 中用的蒸馏水或去离子
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