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- 文献和实验
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5
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96T
产品货号:XFP40589
产品规格:96T
储存条件:2-8℃
有效期:6个月
本产品仅供科研实验用,不做其他用途!
样品收集、处理及保存方法
以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中,不得使用叠-氮-钠做为防腐剂。
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2. 血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3. 细胞培养物上清或其它生物标本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
4. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免
反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
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文献和实验荧光法更为准确地研究NA神经元及其通路,而且不需借助显微分光光度计测定各种单胺递质呈现荧光的不同波长加以区别,免疫细胞化学应用不同的标志酶免疫染色就可区别各种神经元和/或确定神经元内所含的不同的神经递质。如DβH免疫反应阳性在哺乳动物 即可做为NA能神经元的标志,因为哺乳动物不存在其它合成NA的酶,所有合成NA的部位均有DβH。酪氨酸羟化酶(TH)和多巴脱羧酶(DDC)阳性表示多巴胺(DA)能神经元系统,而TH,DDC,DβH和苯乙醇胺位甲基移酶(PNMT)免疫反应阳性即为肾上腺素(E)能神经元系统
动物即可做为NA能神经元的标志,因为哺乳动物不存在其它合成NA的酶,所有合成NA的部位均有DβH。酪氨酸羟化酶(TH)和多巴脱羧酶(DDC)阳性表示多巴胺(DA)能神经元系统,而TH,DDC,DβH和苯乙醇胺位甲基移酶(PNMT)免疫反应阳性即为肾上腺素(E)能神经元系统。 借助免疫细胞化学技术,至目前为止,还发现了有40种以上的神经肽分布于中枢神经、下丘脑、垂体、松果体、脊髓、神经节 及外周神经系统特定的神经元中。在脊椎动物,这些肽类物质在体内的分布呈多位性,不局限于神经
能神经元,同样,应用多巴胺羟化酶(DβH)抗血清能较甲醛或乙醛酸诱发荧光法更为准确地研究NA神经元及其通路,而且不需借助显微分光光度计测定各种单胺递质呈现荧光的不同波长加以区别,免疫细胞化学应用不同的标志酶免疫染色就可区别各种神经元和/或确定神经元内所含的不同的神经递质。如DβH免疫反应阳性在哺乳动物即可做为NA能神经元的标志,因为哺乳动物不存在其它合成NA的酶,所有合成NA的部位均有DβH。酪氨酸羟化酶(TH)和多巴脱羧酶(DDC)阳性表示多巴胺(DA)能神经元系统,而TH,DDC,DβH和苯乙
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