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48T
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文献和实验相关专题 核糖核酸酶 H是从小牛胸腺中发现而被分离的(Stein and Hausen 1969,Hausen and Stein 1970),但该酶现已知广泛存在于哺乳动物细胞、酵母、原核生物及病毒颗粒中。所有类型细胞均含有不止一种核糖核酸酶H。核糖核酸酶H(RNaseH)催化DNA-RNA杂合体的RNA部分的核内降解,产生不同链长带3'羟基和5'磷酸末端的寡核糖核酸。 在许多反转录病毒中与多功能
自主序列复制系统(self-sustainedsequence replication,3SR),又称依赖核酸序列的扩增(Nucleic acid sequence-based amplification,NASBA)或再生长序列复制技术.1990年Guatelli等首先报道了这一技术.NASBA主要用于RNA的扩增、检测及测序.该反应有赖于AMV逆转录酶,T7RNA多聚酶和核酸酶H(RNaseH)共同协作而完成. 3SR反应体系中除含有上述三种酶外,还含有dNTP
录酶,T7RNA多聚酶和核酸酶H(RNaseH)共同协作而完成. NASBA反应体系中除含有上述三种酶外,还含有dNTP,NTP(核糖核苷), 两种特殊的引物和缓冲液.引物I3'末端与靶序列互补,5'端含T7RNA多聚酶的启动子,这一引物是用于合成cDNA的.引物Ⅱ的碱基序列与cDNA的5'未端互补. 在NASBA反应时,首先引物Ⅰ与RNA模板复性(结合),AMV逆转录酶催化合成cDNA,RNaseH水解cDNA上的RNA,形成一条单链的DNA;引物Ⅱ随即与此cDNA
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