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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
5
- 规格:
96T
产品货号:XFR61663
产品规格:96T
储存条件:2-8℃
有效期:6个月
本产品仅供科研实验用,不做其他用途!
样品收集、处理及保存方法
以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中,不得使用叠-氮-钠做为防腐剂。
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2. 血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3. 细胞培养物上清或其它生物标本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
4. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免
反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
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文献和实验细胞表达系统的主要优点是蛋白翻译加工后机制接近体内的天然形式,容易保留生物活性,缺点是很难高通量表达,且建立稳定细胞系的技术难度大,操作繁琐,生产成本高。 无细胞表达系统 和传统的体内表达不同,无细胞表达系统是以细胞裂解液为基础,在试管中进行的蛋白表达。无细胞蛋白表达系统是一个开放系统,不需要依赖活细胞。使用从不同物种的细胞(例如,大肠杆菌、小麦胚芽、塔氏利什曼原虫、兔网织红细胞、昆虫或人类细胞)中提取的生物分子翻译机制,在溶液中对重组蛋白质进行生产的过程。 开放性系统赋予蛋白表达的灵活性,无细胞
Western时,您会得到一个量化值,哪些组分占多少。Sampler Kit包含细胞质MEK1/2、线粒体凋亡诱导因子(AIF)、组蛋白H3和细胞骨架波形蛋白的兔单克隆抗体,以及山羊抗兔IgG。 研究人员也可利用试剂盒中的建议,或搜索文献,组装自己的Western blot或ELISA试剂盒。不过Cormier也提醒,并非每个抗体都有着它应有的特异性。 下游的分析 与超速离心相比,基于试剂盒的细胞分级分离方法快速又方便,也适合多个下游应用,如EMSA、报告基因分析、酶活
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