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48T
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
Human晶体蛋白α抗体(Cryα Ab)ELISA Kit
3. 样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
Human晶体蛋白α抗体(Cryα Ab)ELISA Kit5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
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文献和实验双抗体夹心ELISA法检测待测样品sTNF- α 含量 【基本原理】 选用两株针对TNF-α分子不同位点的单克隆抗体,即McAb1 (包被抗体)与McAb2 (酶标抗体)。先用McAb1 包被固相载体,使待测sTNF-α与之特异性结合,然后再加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的McAb2 ,则形成McAb1 -sTNF-α -HRP标记McAb2 复合物,再加入HRP底物,则酶催化底物显色,测定样品与标准品光密度值(即OD值),绘制标准曲线,即可从标准曲线中
实验试剂 1. 包被抗体McAb1 :使用时用包被液作适当稀释(如1:100)。 2. 酶标抗体McAb2 :以辣根过氧化物酶(HRP)标记。使用时用稀释液作适当稀释,其稀释度根据预试验结果而定。 3. rhuTNF-α标准品:已知含量的rhuTNF-(10ng/ml),使用时用稀释液作倍比稀释成7个浓度:5 ng/ml,2.5 ng/ml,1.25 ng/ml,625pg/ml,312 pg/ml,156 pg/ml
因各种抗体而异,称为可变区,分别用 VH 和 VL 表示。两者构成抗体的抗原结合部位,只与相应的抗原决定簇匹配,发生特异性结合,是抗体专一性结合抗原的结构基础。 IgG 可被木瓜蛋白酶分解为三个区段,其中两个相同的区段称抗原结合片段(Fab)。每个 Fab 都保存结合抗原的能力,但只有一个抗原结合位点,是单价的,与抗原结合后不出现凝集或沉淀。另一区段称 Fc 段,无抗体活性,但具有 IgG 特有的抗原性。 IgG 可被胃蛋白酶分解为两个片段,一个 Fab 双体,称F(ab')2,能和两个相同的抗原结合
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