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- 文献和实验
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5
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96T
产品货号:XFC81569
产品规格:96T
储存条件:2-8℃
有效期:6个月
本产品仅供科研实验用,不做其他用途!
样品收集、处理及保存方法
以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中,不得使用叠-氮-钠做为防腐剂。
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2. 血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3. 细胞培养物上清或其它生物标本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
4. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免
反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
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文献和实验近年来,肺癌的肿瘤标志物(tumor marker,TM)研究十分活跃。肺癌常用的肿瘤标志物很多,根据美国NACB准则,这里主要介绍神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胃泌素释放肽前体 (ProGRP)、癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)和鳞状细胞癌相关抗原(SCCA)等几种比较肯定的肿瘤标志物。 表1 国际上不同专家组对肺癌标志物应用的建议 1.神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enol
的TM(敏感性70%~80%)。在神经母细胞瘤时升高。脑脊液中NSE可作为脑损伤、脑梗死的诊断指标。 (8)细胞角蛋白相关TM 细胞角蛋白(CK)参与构成上皮细胞骨架。依其氨基酸序列不同分为CK1~CK20共20种。Cyfra21-1为角蛋白19的片断,适用于非小细胞肺癌(总的敏感性52.9%)的诊断,尤其是鳞癌。 (9)鳞状上皮癌相关抗原(SCCA) 为组织抗原,可由妇女生殖道上皮以及不同器官的磷状上皮癌分泌。为宫颈鳞癌的首选TM
检测消化道肿瘤外周血CD44水平。 电镜:电镜酶细胞化学技术、免疫电镜技术、原位杂交电镜技术。 分子学水平:聚合酶链反应法(PCR)是一种极为简单、敏感、高效、特异和快速的能在体外进行扩增DNA的技术。 目前,国内外用RT-PCR方法检测外周血中的肿瘤细胞的主要标记基因有细胞角蛋白19(CK19 mRNA)和20(CK20mRNA)用于上皮性恶性肿瘤;癌胚抗原(CEAmRNA)用于结直肠癌、胃癌、胰腺癌、乳腺癌等CEA分泌性肿瘤;甲胎蛋白( AFPmRNA)用于肝细胞癌微转移的检测
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