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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
5
- 规格:
96T
产品货号:XFC81001
产品规格:96T
储存条件:2-8℃
有效期:6个月
本产品仅供科研实验用,不做其他用途!
样品收集、处理及保存方法
以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中,不得使用叠-氮-钠做为防腐剂。
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2. 血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3. 细胞培养物上清或其它生物标本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
4. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免
反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
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文献和实验1.结核病的特异性抗体:在结核性浆膜腔积液中存在特异性IGG抗体,常用ELISA法或ABC-ELISA法检测,由于各试剂盒选用抗原不同,如结核杆菌化蛋白衍生物或结核分支杆菌抗原等,检测方法差异造成结果的敏感性和特异性也不同,一般认为用Ag5作抗原最佳。近年来用聚合酶链反应检测积液中结核杆菌DNA,是目前最敏感的特异性检查方法,但应注意由于污染而造成的假阳性。 2.肿瘤标志物 (1)癌胚抗原(CEA):CEA是一种分子量较大的糖蛋白,当积液中CEA>20μg/L,积液
较特异的自身抗体,在 PM 患者中阳性率约为 13%。目前,这些自身抗体的常用检测方法是 ELISA 和免疫印迹法。 2.1.3 抗 dsDNA 抗体:该自身抗体对诊断 SLE 有较高的特异性 (95%),是 SLE 分类标准之一。其抗体滴度在多数 SLE 患者中与病情活动程度相关,可作为治疗监测和预后评价的指标,并与 SLE 患者的肾损害相关。目前公认的检测方法为 IIF、放射免疫法(Farr 法)和 ELISA 法。 2.1.4 抗核小体抗体 (AnuA
刻换成压力培养基; (3)在检测蛋白水平之前,一定先在mRNA水平予以检测,如果检测出目的基因的转录,再行蛋白水平的检测;据我的经验,好像委托公司进行ELISA法检测更为价廉物美。 28、免疫磁珠分离细胞的问题: 问:现在采用间接免疫磁珠分离干细胞的方法: 一直采用的方法是: 10%BSA封闭一小时, 抗体/培养基稀释 4度孵育半小时 二抗磁珠/pbs稀释 4度孵育半不时 刚分离出的细胞状态还可以,但是养几天就不是很好了,考虑是否是因为操作时间太长。最近看了几篇文献,好像他们用磁珠
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