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48T
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文献和实验「没爹」小鼠来了!科学家只用 1 个卵细胞培育出健康小鼠,还可正常繁殖后代
对 DNA 甲基化状态进行分析,结果发现,在大多数卵母细胞中,一个等位基因被低甲基化,而另一个等位基因仍被高甲基化,证明了使用该编辑系统的成功。此外,在体外胚胎培养并移植到小鼠子宫后,这些编辑过的基因标记在着床前发育期间依然维持甲基化,类似于自然受精发育后的基因标记。 接下来,为了确定同时通过修饰 2 个父系甲基化 ICRs 和 5 个母系甲基化 ICRs 是否可以进一步延长发育,他们构建了七个区域均被修饰的孤雌生殖胚胎。随后将 158 个囊胚移植到 12 只假孕母鼠体内后,在第 13.5 天时
基因组 DNA 为模板进行 PCR 扩增,电泳确认 PCR 产物大小,对大小正确的产物进行测序,如测序结果与理论序列一致,则确认该基因编辑小鼠模型为正确重组模型。 TIPS 双臂 PCR 产物需测通:我们在实践中发现,即使 Donor 序列完全正确,部分鼠会存在突变或片段缺失的情况,我们推测是细胞在 Donor 重组前或过程中对 Donor 发生了编辑或重组后结构不稳定等原因所致,所以只对 Donor 各个部分接头测序是不严谨的,建议测通。 下面以 CKO 模型鉴定为例说明双臂 PCR 鉴定
随着生命科学技术的不断发展,各种小鼠模型(转基因、基因敲除、基因敲入、人源化等)被广泛的开发和应用,如江苏集萃药康生物科技股份有限公司目前拥有自主品系数量已高达 22000+,覆盖代谢、免疫、肿瘤、神经、发育等领域,保存这些模型需要大量的人力、财力和空间,而冷冻保存技术的出现,给科研学者提供了安全和经济保存种群资源的方法。此外精子冷冻在动物育种上可加速遗传改良,保存珍稀物种品系,防止遗传漂变,节省饲养空间等诸多优点,本文将简要介绍小鼠精子冷冻技术发展重要的几个历程。 第一道困境 也是故事
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