小鼠原代肠道干细胞

肠道干细胞也称肠道上皮干细胞，位于肠粘膜隐窝的基底部，具有自我更新与增殖分化功能。肠道干细胞可分化为肠上皮的所有细胞，参与正常肠粘膜组织更新的生理过程及一些病理过程，对于补充不断丧失的各种肠粘膜细胞具有重要意义。

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注意事项↓ 悬浮细胞漂浮的处理方法 注意:瓶中运输培养基不能继续使用，请换用按照说明书培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。培养悬浮细胞建议用未经TC处理的培养瓶。 1.收到货发现有任何异常现象、污染、漏液、细胞漂浮等，请拍照记录，并及时联系我们销售人员或技术支持; 2.用 75% 酒精擦拭瓶身，封口膜可以不用撕去，将 T25 瓶置于培养箱中静置 2~4h 后进行操作;悬浮细胞请将培养瓶竖立在培养箱中静置。在此期间，请查看说明书以确定细胞属性; 3. 静置4h后，请将瓶内所有细胞收集至6个15ml的离心管110g(1000rpm)离心3min,将所有离心后的细胞沉淀收集到一个T25培养瓶内，平放10分钟，镜下观察细胞密度，拍照记录后放入培养箱中继续培养，第二天密度达到80%即可传代; 4.悬浮细胞传代方法:观察细胞无碎片无死细胞的情况下，建议直接加入新鲜完培直接分瓶即可。

贴壁细胞漂浮的处理方法 注意：部分细胞由于贴壁松散，会出现运输后漂浮，冬天气温低时也会出现细胞收缩漂浮，属于不可避免 因素，正确处理后均可以正常生长。 1 .将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管，离心收集细胞(1200rpm约250g-300g离心力，离心 3-5min)去除旧培养基; 2. 用PBS重悬细胞，将所有细胞收集到一个离心管中，再次离心(1200rpm约250g-300g离心 力，离心3-5min)去除PBS; 3 .加入1ml左右胰酶EDTA溶液，0.25%重悬细胞，混匀即可，建议震动离心管混匀，避免吹打细 胞，放入培养箱消化细胞，根据细胞特性决定消化时间(TM3、TM4、293 系列约1~2分钟); 注意：部分细胞不能使用胰酶消化，请注意查看细胞说明书;单颗漂浮的细胞不需要胰酶处理。 4. 消化好后，用移液枪轻轻吹打细胞悬液，使细胞团分散，迅速加入3-5ml含10%以上血清的培 养基混匀终止消化，离心(1200rpm 3min)去除胰酶; 5.加入5ml左右的细胞完全培养基混匀，按比例接入无菌培养瓶中; 6. 显微镜下观察细胞是否成均匀分散的单颗细胞，若有3-5个成团的小细胞团可不用重新消化，使 之贴壁后待细胞生长稳定后再次传代消散细胞。

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