Caspase-2酶活性测定试剂盒

Caspase-2酶活性测定试剂盒
英文名：Caspase-2 Colorimetric Assay Kit
描述：
Caspase是参与细胞凋亡过程的蛋白酶家族，包含10多个成员。Caspase-2也称Ich-1或Nedd-2，在凋亡信号转导过程中被激活。Caspase-2 mRNA具有两种不同剪切体，其全长mRNA翻译的蛋白可促进凋亡，而短蛋白产物则可抑制凋亡。Caspase-2可以被Caspase-1,3和granzyme B激活。测定原理：Caspase-2特异水解多肽底物VDVAD-pNA (Val-Asp-Val-Ala-Asp-p-nitroanilide)，释放的游离硝基ben胺pNA在405 nm有最大吸光度。采用可见光光度比色法测定pNA而得到Caspase活性。适用于检测哺乳动物组织、细胞Caspase-2活性。
组成 (所示为100次检测, 50次检测试剂量减半)
1. 裂解缓冲液 20 ml, 4 ºC
2. 反应缓冲液 10 ml, 4 ºC
3. 2 mM IETD-pNA  0.2 ml, -20 ºC避光
4. 10 mM pNA标准品 0.5 ml, -20 ºC避光
试剂常温运输，到达后按要求储存，1年内稳定。
所需仪器：
可见光分光光度计配100μl比色杯，或酶标仪。最佳波长405 nm，也可测OD400~450 nm但灵敏度略降。
白对照OD405，为样品Caspase水解底物产生的pNA吸光度。根据标准曲线计算其含量，并以蛋白浓度校正之。
说明：
1. Caspase酶活力单位定义：参考Chemicon公司One unit is the amount of enzyme that will cleave 1.0 nmol of the colorimetric pNA-substrate per hour at 37 ºC under saturated substrate concentrations。即当底物饱和时,一个Caspase酶活力单位定义为37 ºC 1小时水解pNA底物，产生1nmol游离pNA。根据pNA标准曲线和样品OD值，可计算出Caspase酶活力单位。
2. 除了处理组外，可设置阳性凋亡诱导剂组，阴性实验对照可包括不具有凋亡诱导作用的试剂(如果能得到)处理组、溶剂对照组、或凋亡诱导零时间点。