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- EK-BIO（酶研生物）
- ML10644
- 2025年07月12日
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- 文献和实验
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48T
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文献和实验缺点 1 放射性的东西可否不用 2 要加接头,还要磷酸化 clontech 的: 第二链的合成有PCR技术,是否会引起碱基突变 Novagen的： 优点 1 提供两种primer，oligo dT & random primer，可根据目的进行选择； 2 提供EcoRⅠ/HindⅢ酶切位点，便于定向克隆； 缺点 不知什么原因第二链合成效率不高
)9 ]在RNA 模板上没有特异性结合位点，所有RNA 都可以做为第一链cDNA合成的模板； (2) Oligo(dT)18 与poly(A)+ mRNA 的3’-末端互补，只有poly(A)+ mRNA 可作为cDNA合成的模板； (3) 采用序列特异性引物以其结合位点为起始位点。 2．当第一链cDNA合成条件与PCR的条件能够兼容时，则本试剂盒的第一链cDNA合成产物可直接加入PCR反应混合物中进行反应。 3．第一链cDNA合成产物同样可经过处理后作为第二链合成
-PCR技术的改进:改进之一是利用锁定引物((lock docking primer)合成第一链cDNA,即在oligo(dT)引物的3'端引入两个简并的核苷酸【5'-Oligo(dT)16_30MN-3', M=A/G/C;N=A/G/C/T】，使引物定位在poly(A)尾的起始点，从而消除了在合成第一条cDNA链时oligo(dT)与poly(A)尾的任何部位的结合所带来的影响;改进之二是在5‘端加尾时，采用poly(C)，而不是poly(A);改进之三是采用RNase H一莫洛尼氏鼠白血.病毒
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