- ￥90
- AMEKO
- 国产
- RC61986-100ml
- 2025年07月16日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
室温,12个月
- 库存：
现货
- 供应商：
鹿森生物
- 规格：
100ml
用途：裂解细菌(革兰阳性菌)中提取RNA
注意事项：主要由Tris-HCl、EDTA、SDS、氯化钠等组成,临用前加入蛋白酶K。
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文献和实验】1. 消化缓冲液：100 mM NaCl，10 mM Tris.Cl (pH8.0) 25 mM EDTA (pH8.0)，0.5% (w/v) SDS，0.1 mg/mL 蛋白酶 K。2. 7.5mol/L 乙酸铵。3. 100% 乙醇。4. 酚/氯仿/异戊醇。【实验方法与步骤】1. 将新鲜组织剪成小块并立即置于液氮中冻存；2. 将 200 mg～1 g 的组织用预冷的研钵研碎，或用锤子将其捣为细粉末，每 100 mg 组织用 1.2 mL 消化缓冲液悬浮，然后于 50℃ 摇荡温育 12~18 h
加热灭活酶。通过凝胶提取试剂盒纯化消化的pET-32α（+）载体骨架和从pMD18-T载体切下的基因片段。用T4 DNA连接酶在23℃下用pET-32α（+）载体骨架连接基因片段1小时，载体末端和插入末端的比例为1：3（fmol）。将10μl连接反应与100μl感受态大肠杆菌 BL21（DE3）在冰上混合10分钟，并将混合物在42℃下孵育90秒。加入800μlLB并在37°C下孵育40分钟。涂在含有100μg/ ml氨苄青霉素的LB平板上。在37°C孵育过夜。通过菌落PCR筛选插入物的存在或制备
度高，与一些还原剂(如DTT、巯基乙醇)兼容。但有些去垢剂、黄酮、碱性缓冲液会干扰测定。 DC (Detergent Compatible) 蛋白测定 是一种适用于含有去垢剂的蛋白样品比色测定方法。该方法类似于常规的Lowry 测定方法 (Lowry et al.1951)，但经过改良，节省了操作时间。DC 蛋白测定只需要15分钟的温育过程，而且吸光值读数能保持2小时的稳定。它可以兼容NaOH和多种去污剂，如10% SDS、2% NP-40、1% CHAPS、1% Triton X-100
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