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2879200-CN
2879200-CN哈希HACH 游离氨试剂 量程:0.01 to 0.50 mg/L NH3–N
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文献和实验【共享】 蛋白质含量测定法/蛋白质沉淀法/Western免疫印迹
。(2)仍有一些物质干扰此法的测定,主要的干扰物质有:去污剂、 Triton X-100、十二烷基硫酸钠(SDS)和0.1N的NaOH。(如同0.1N的酸干扰Lowary法一样)。(3)标准曲线也有轻微的非线性,因而不能用Beer定律进行计算,而只能用标准曲线来测定未知蛋白质的浓度。(二)试剂与器材1. 试剂:(1)标准蛋白质溶液,用 g—球蛋白或牛血清清蛋白(BSA),配制成1.0mg/ml和0.1mg/ml的标准蛋白质溶液。(2)考马斯亮兰G—250染料试剂:称100mg考马斯亮兰G—250,溶于50
法。 此法的缺点是: (1)由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同,因此bradford法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差,在制作标准曲线时通常选用g—球蛋白为标准蛋白质,以减少这方面的偏差。 (2)仍有一些物质干扰此法的测定,主要的干扰物质有:去污剂、triton x-100、十二烷基硫酸钠(sds)和0.1n的NaOH。(如同0.1n的酸干扰lowary法一样)。 (3)标准曲线也有轻微的非线性,因而不能用beer定律进行计算,而只能用标准曲线来测定未知蛋白质的浓度。 (二)试剂
液 DAB即3,3-二氨基苯联胺 试剂:DAB(常用四盐酸盐) 50 mg 0.05mol/L TB 100 ml 30% H2O2 30~40 μl 配制方法:先以少量0.05mol/L(pH7.6)的TB溶解DAB,然后加入余量TB,充分摇匀,使DAB终浓度为0.05%,过滤后显色前加入30%的H2O 230~40μl,使其终浓度为0.01%。 DAB显色液主要用于免疫过氧化物酶法(如酶标法、PAP法等),其终产物可直接在光镜下观察
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