YCB/酵母碳源基础（含葡萄糖，含氨基酸）

巴斯德毕赤酵母表达系统

　　七十年代巴斯德毕赤酵母曾被用于生产单细胞蛋白（SCP），有很好的发酵基础，菌体密度可达100g/L干重。其生长培养液的组分包括无机盐、微量元素、生物素、氮源和碳源，廉价而无毒。它能在以甲醇为唯一碳源的培养基中快速生长，其中醇氧化酶AOX——甲醇代谢途径的关键酶可达细胞可溶性蛋白的30％。而在葡萄糖、甘油或乙醇作为碳源的培养细胞中则检测不到AOX。AOX的合成是在转录水平调控的。其基因启动子具有明显的调控功能，可用于调控外源基因的表达。此调控作用是由一般碳源抑制/解抑制及碳源

酿酒酵母培养基配方与酵母细胞培养和诱导表达方法

的1 -10%)在丰富培养基上生长缓慢(在非发酵性碳源培养基中不能生长，比如葡萄糖)。这些微小菌落在YPD培养基上呈现典型的牛奶白色，而正常的克隆则呈奶油色。这种现象可以通过保存甘油菌避免 酵母菌株可以在含15%甘油的YPD中保存数年，不需在干冰/乙醇上快速冷冻。要确保冷冻前菌液和甘油培养基混合均匀。 需用新鲜培养的细胞冻存菌种，可以从固体平板上挑取菌落冻存(挑取火柴头大小的一块)或者取液体培养的菌株(离心取大约5 x 107 个细胞)。可以直接从选择培养基上取菌株用YPD/甘油

甲醇酵母细胞表达系统

中外源基因都带有指导分泌的信号肽序列，使表达的外源目的蛋白分泌到发酵液中，有利于分离纯化；（3）发酵工艺成熟，易放大。已经有大规模工业化高密度生产的发酵工艺，且细胞干重达100g/l以上，表达重组蛋白时，已成功放大到10000升；（4）培养成本低，产物易分离。毕赤酵母所用发酵培养基十分廉价，一般碳源为甘油或葡萄糖及甲醇，其余为无机盐，培养基中不含蛋白，有利于下游产品分离纯化；而酿酒酵母所用诱导物一般为价格较高的半乳糖；（5）外源蛋白基因遗传稳定。一般外源蛋白基因整合到毕赤酵母染色体上，随染色体复制