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10mg
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文献和实验化及CpG岛 DNA甲基化是最早发现的基因表观修饰方式之一,可能存在于所有高等生物中。DNA甲基化能关闭某些基因的活性,去甲基化则诱导了基因的重新活化和表达。甲基化的主要形式有5-甲基胞嘧啶,N6-甲基腺嘌呤和7-甲基鸟嘌呤。原核生物中CCA/TGG和GATC常被甲基化,而真核生物中甲基化仅发生于胞嘧啶。 DNA的甲基化是在DNA甲基化转移酶(DNMTs)的作用下使CpG二核苷酸5'端的胞嘧啶转变为5'甲基胞嘧啶。这种DNA修饰方式并没有改变基因序列,但是它调控了基因的表达[3]。脊椎动物基因的甲基
物可选择其他溶媒,首-选二甲基亚矾(DMSO),但使用时浓度不应大于0.5%。 对照: 每一项试验中,在有无代谢活化系统条件下均应设阳性和阴性(溶媒)对照组。 阳性对照:当使用代谢活化系统时,阳性对照物必须是要求代谢活化、并能引起突变的物质,可以使用3-甲基胆蒽(3-methylcholanthrene)、N-亚硝基二甲-胺(N-nitroso-dimethylamine)、7,12-二甲基苯并[a]蒽(7, 12-dimethylbenz[a]anthracene)等。在没有代谢活化系统
1. 3H―SAM掺入后液闪检测法 (1)将约2 μg 基因组与足量3H标记的SAM,甲基化酶(SssⅠ或HpaⅡ)共同温育,SAM的甲基化基团将被掺人到目的DNA中未甲基化的胞嘧啶上。 (2)以WhatmanDE81滤纸过滤此温育混合物,并以液闪缓冲液淋洗去掉未结合的3H标记的SAM,以液闪检测该滤纸上结合的’H标记的SAM量。 (3)如此值较高,则提示原来的甲基化水平低,反之亦然。
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