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文献和实验Neuron:解密睡眠的新工具来了!北大李毓龙实验室开发新型组胺 GRAB 探针
等重要行为,但其分子调控机制仍是未解之谜。为此,人们亟需发展灵敏、特异的工具用于高时空分辨率监测组胺动态变化。 2023 年 3 月 15 日,北京大学李毓龙实验室在 Neuron 杂志在线发表研究论文,报道了一种新型基因编码的组胺探针 GRABHA 的开发,并结合这一新工具深入探究了睡眠觉醒过程中组胺的动态调控。 李毓龙实验室长期致力于系统性发展神经化学分子检测技术,先后开发了针对乙酰胆碱、多巴胺、去甲肾上腺素、五羟色胺、嘌呤类、脂类和多肽类神经递质/调质的荧光探针,此次发表的 GRABHA
称为原代细胞培养,适合用腺病毒感染。由于细胞增长缓慢,病毒感染效率较低,因此需要进行 MOI 梯度摸索实验,选择适合的 MOI 进行实验,从而提高病毒感染效率(MOI 摸索实验参考第一部分第四小节)。 原代细胞培养和感染注意事项: 1、由于原代细胞增长缓慢,使用腺病毒感染,可以在接种时提高汇合度到 50-60% 左右,确保在感染后 2 天时细胞汇合度达到 90~100%。感染非分裂细胞如神经元细胞,接种后不再增殖,可按照 100% 的汇合度进行接种。 2、若使用慢病毒感染原代细胞,建议接种时细胞
作用。在哺乳动物的神经系统中,钙离子是一类重要的神经元胞内信号分子,神经元静息状态下,胞内钙离子浓度约为50-100nM,而当神经元活动的时候,胞内钙离子浓度能上升10-100倍,而钙离子对于突触囊泡释放必不可少;神经元在放电的时候会爆发出一个短暂的钙离子浓度高峰,这意味着神经元钙离子浓度表征突触传递和神经元活动。神经元钙离子浓度表征突触传递和神经元活动示意图因而,神经元钙离子成像技术的原理就是借助钙离子浓度与神经元活动之间的严格对应关系,利用特殊的荧光染料或者蛋白质荧光探针(钙离子指示
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