重组增强绿色荧光蛋白 EGFP（需另购干冰）

全新发布：外泌体样本收集指南

。 4、低温原则 所取样本离体后，应尽快置于干冰或 -80℃ 冰箱中，并保证在实验前始终处于 -70℃ 以下， 以避免外泌体降解。 二、样本制备指南 1、细胞上清 1) 细胞在正常含有血清的培养基中培养一定时间，贴壁细胞密度在 70%-80%，悬浮细胞密度在 60%-70%； 2) 对于贴壁细胞，去除原有培养基，加入适量的 PBS 缓冲液冲洗一次，彻底去除血清；对于悬浮细胞，300 g ，4℃，10 min 收集细胞，然后换为新的不含外泌体的培养基或者无血清替代培养基继续培养 24-48 h， 根据细胞

荧光标记怎么选择？

光蛋白都有其独特的激发波长和发射波长，需匹配荧光成像系统的检测范围。同时检测多种荧光蛋白时，需避免颜色和光波长的冲突。绿色和红色荧光蛋白较为常用。红色或近红外的荧光蛋白更适用于活体成像。 单体性质：荧光蛋白多聚体可能会影响融合蛋白的生物学功能和定位，应尽量选择单体。 亮度：荧光蛋白的亮度值由消光系数与量子产率的乘积计算得出。在许多情况下，将荧光蛋白的亮度与 EGFP（设定为 1）进行比较（表 1），应选择足够亮的荧光蛋白便于检测和成像。 PK 值：每个荧光蛋白都有其最适 pH 值，此时的荧光强度最高。在细胞

真核细胞表达系统的类型与常用真核细胞表达载体

的、高表达目的基因的细胞株。 插入外源基因的克隆位点包括Sal1、BamH1和EcoR1位点。注意在此载体中有二个EcoR1位点存在。 2、pEGFP, 增强型绦色荧光蛋白表达载体(Enhanced Fluorecent Protein Vector) 特点: pEGFP表达载体中含有绿色荧光蛋白，在PCMV启动子驱动下，在真核细胞中高水平表达。载体骨架中的SV40 origin使该载体在任何表达SV40 T 抗原的真核细胞内进行复制。Neo抗性盒由SV40早期启动