重组增强绿色荧光蛋白 EGFP（需另购干冰）

双荧光素酶检测的原理和应用

表达后修饰，直接具有完全酶活。发光机制生物荧光实质是一种化学荧光。萤火虫荧光素酶在Mg2+、ATP、O2的参与下，催化D2荧光素(D2luciferin) 氧化脱羧，产生激活态的氧化荧光素，并放出光子，产生550～580 nm 的荧光，其化学反应式如下。这种无需激发光就可发出偏红色的生物荧光，其组织穿透能力明显强于绿色荧光蛋白(GFP)。荧光素酶是靠酶和底物的相互反应发光，特异性很强，灵敏度高，由于没有激发光的非特异性干扰，信噪比也比较高。二、荧光素酶报告基因的检测流程1、重组质粒制备: 制备含有

全新发布：外泌体样本收集指南

。 4、低温原则 所取样本离体后，应尽快置于干冰或 -80℃ 冰箱中，并保证在实验前始终处于 -70℃ 以下， 以避免外泌体降解。 二、样本制备指南 1、细胞上清 1) 细胞在正常含有血清的培养基中培养一定时间，贴壁细胞密度在 70%-80%，悬浮细胞密度在 60%-70%； 2) 对于贴壁细胞，去除原有培养基，加入适量的 PBS 缓冲液冲洗一次，彻底去除血清；对于悬浮细胞，300 g ，4℃，10 min 收集细胞，然后换为新的不含外泌体的培养基或者无血清替代培养基继续培养 24-48 h， 根据细胞

荧光标记怎么选择？

光蛋白都有其独特的激发波长和发射波长，需匹配荧光成像系统的检测范围。同时检测多种荧光蛋白时，需避免颜色和光波长的冲突。绿色和红色荧光蛋白较为常用。红色或近红外的荧光蛋白更适用于活体成像。 单体性质：荧光蛋白多聚体可能会影响融合蛋白的生物学功能和定位，应尽量选择单体。 亮度：荧光蛋白的亮度值由消光系数与量子产率的乘积计算得出。在许多情况下，将荧光蛋白的亮度与 EGFP（设定为 1）进行比较（表 1），应选择足够亮的荧光蛋白便于检测和成像。 PK 值：每个荧光蛋白都有其最适 pH 值，此时的荧光强度最高。在细胞