胰蛋白酶-EDTA溶液(0.05%:0.02% 不含酚红）

免疫组化染色方法及常用抗原修复方法

，Rb，TopoismeraseⅡ 等。 2、酶消化方法 常用 0.1% 胰蛋白酶和 0.4% 胃蛋白酶液。胰蛋白酶使用前预热至 37℃，切片也预热至 37℃，消化时间约为 5~30 分钟（胰酶的最终浓度可以根据使用者的要求进行调整，浓度范围可以从 0.05% 至 0.25% ）； 胃蛋白酶消化37℃ 时间为 30 分钟。皂素（Saponin）：一般使用浓度为2~10mg/ml的saponin 溶液，消化时间为室温孵育 30 分钟。 适用于被固定遮避的抗原，其中有：Collagen

流式细胞术样本制备技术

干净； 将组织置于平皿中，用眼科剪刀剪成小颗粒（1~2 mm3）； 加入 30 倍组织量的蛋白酶溶液（0.1% 胰蛋白酶和 0.02%EDTA 等比混合）； 移液管转至三角烧瓶，置于37℃水浴或者恒温箱中消化 20~60 min，每隔5~10 min震荡一次。若需消化较长时间，可每隔 15 min 将 2/3 的消化上清液转移到离心管中冰浴或离心去除消化液，加入含血清培养基终止消化，另补充新的消化液至三角烧瓶中继续消化； 将消化液或分批收集的细胞悬液经 200~300 目的滤网过滤，300 g

胰蛋白酶的提取

）。 激活后的酶溶液再进一步分离纯化。 ［ 试剂和器材］1、 试剂（1）pH2.5～3.0乙酸化的水溶液（2）10%（体积分数）乙酸（3）2mol/L硫酸（4）固体硫酸铵（5）无水CaCl 2（6）结晶胰蛋白酶（7）25%乙醇溶液(含0.015mol/ＬHCl 、0.05mol/ＬCaCl 2 )（8）95%（体积分数）乙醇（9）5mol/Ｌ NaOH（10）丙酮