100×TE缓冲液,pH=8.0

手把手教你做好体外 DNA 重组

；3. 用等体积酚/氯仿/异戊醇抽提样品，1700×g，离心 10 min。如果样品溶解得不好，再加 1 体积不含蛋白酶 K 的消化缓冲液，重复离心。如果在界面上有一层厚的白色物质，重复抽提一次，将上层 (水溶液) 转移至一个新离心管中；4. 加入 1/2 体积 7.5mol/L 乙酸铵和 2 倍体积 100% 乙醇，12 000 rpm 离心 2 min；5. 用 70% 乙醇洗涤，晾干，沉淀用 TE 缓冲液或无菌双蒸水重新溶解, 使终浓度在约 1 mg/mL。注: 加入 0.1% 的 SDS 和 1? 滋

如何做好 Southern 杂交？

简单，分离范围广（200 bp~50 kb），实验成本低。下表列举了不同浓度琼脂糖凝胶能分离的 DNA 片段范围。表：不同浓度琼脂糖凝胶分离 DNA 片段的范围琼脂糖凝胶浓度（%）分离 DNA 片段范围（kb）0.3 5-600.6 1-200.7 0.8-100.9 0.5-71.2 0.4-61.5 0.2-32.0 0.1-21. 制备 0.8% 凝胶：一般用于 Southern 杂交的电泳胶取 0.8%。2. 电泳：电泳样品中加入 6× Loading 缓冲液，混匀后上样，留一或两泳道加

缓冲液配制指南

过硫酸胺 0.1 g ，加超纯水1.0 mL 溶解后，4 ℃ 保存，保存时间为 1 周。（-20 ℃长期保存） 30% 丙烯酰胺 溶于总体积为 50 mL 的水中，定容至 100 mL。室温保存于棕色瓶。 10× PBS（2L） NaOH 调 pH 值至 7.4，定容至 2 L。保存于室温。 还原型 5×SDS 上样缓冲液 混匀后，分装于 1.5 mL 离心管中，4 ℃ 可保存数周，-20 ℃ 可长期保存。 电泳液缓冲液 加蒸馏水溶解定容至 1000 mL 室温保存，1 次溶液可重复