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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
室温,12个月
- 库存:
现货
- 供应商:
鹿森生物
- 规格:
500ml
用途:蛋白印迹转移缓冲液或转膜缓冲液,适用于蛋白质转移到尼龙膜,不适用于PVDF膜和NC膜
注意事项:主要由Tris、甘氨酸、防腐剂组成,临用前稀释后加入甲醇。
储运及效期(运输/储存/有效期):室温,12个月
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文献和实验以毛细管转移进行Northern Blotting转印实验方法与步骤
,静置5 min。 3) 根据图所示,依序在塑料盒上堆栈玻璃板、滤纸 (作为盐桥)、电泳胶、尼龙膜、三层滤纸、与吸水纸,以便以毛细管转移方式将RNA 转印于尼龙膜上;塑料盒内装入适量20×SSC,以便作为转移缓冲液。 以毛细管转移法进行核酸转印 注意: a. 滤纸与尼龙膜应先以20×SSC 润湿,再用于堆栈。 b. 在滤纸、尼龙膜、与电泳胶夹层间可能会有气泡存在,因此在放好电泳胶、尼龙膜或滤纸后,应立即检视,并以食指轻轻平移
;Aprotinin,leupeptin,pepstatin:1 microgram/ml each;Na3VO4: 1 mM;NaF: 1 mM 3. 1X SDS 样品缓冲液:62.5 mMTris-HCl(pH 6.8 于 25° C), 2% w/v SDS, 10%甘油,50 mMDTT, 0.01% w/v溴酚蓝 4. 转移缓冲液:25 mM Trisbase, 0.2 M 甘氨酸, 20%甲醇 (pH 8.3) 5. 10X Tris缓冲盐 (TBS):准备1L
,即可固定DNA 。 3. 转移缓冲液( transfer buffer )的选择: 带正电荷的尼龙膜:可用高盐离子强度( SSC ),但不能充分发挥膜潜能; 0.4N NaOH ,共价结合DNA 是最大优点。 硝酸纤维膜:高盐离子强度促进DNA 与膜结合( 20 × SSC ),低盐离子强度导致小片段DNA 在转移过程中丢失, pH>9 ,DNA 不能与膜结合。 4. 转膜时间( duration of transfer )约 12 hrs
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