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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
低温运输,按要求保存,12个月有效。
- 库存:
现货
- 供应商:
鹿森生物
- 规格:
100ml
用途:裂解缓冲液
注意事项:主要由2%Triton X-100、氯化钠、Tris-HCl、SDS组成,。含有一支1.5ml PMSF。用本裂解液得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
储运及效期(运输/储存/有效期):低温运输,按要求保存,12个月有效。
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文献和实验降解测序。 五、注意事项 细胞裂解采用温和的裂解条件,不能破坏细胞内存在的所有蛋白质-蛋白质相互作用,多采用非离子变性剂(NP40 或 Triton X-100)。每种细胞的裂解条件是不一样的,通过经验确定。不能用高浓度的变性剂(0.2% SDS),细胞裂解液中要加各种酶抑制剂,如商品化的 cocktailer。 使用明确的抗体,可以将几种抗体共同使用。 使用对照抗体: ① 单克隆抗体:正常小鼠的 IgG 或另一类单抗 ② 兔多克隆抗体:正常兔
制成50% 悬液。 每 1mL 细胞裂解液上清加入 100 µL Agarose protein A+G 珠子,4℃ 振荡 10 min,进行预清除。 4℃,10000 rpm 离心10 min移去 Agarose protein A+G 珠子,转移上清至一新离心管中。 用 Bradford 法(考马斯亮蓝染色法)测定上清蛋白浓度。(应至少将细胞裂解液作 1:10 稀释后再测定,这是因为存在于裂解液中的去污剂成分会干扰考马斯亮蓝的作用)。 根据所测得的细胞裂解液蛋白浓度,用 PBS
除>95%的蛋白提取和样品制备过程中所使用的去垢剂,而蛋白和多肽损失极少。此树脂适用于常用去垢剂的去除,如浓度在0.5-1%的SDS、Triton X-100、NP-40和CHAPS。目前有预装的离心柱和离心板形式,最多可处理100 µL样品。另外,您也可以购买HiPPR Detergent Removal Spin Column Kit,其中包含树脂浆和空的离心柱,便于您自己调整样品体积。 整个处理过程相当简单,仅需15分钟。首先是离心去除保存液,之后用缓冲液平衡树脂并离心,重复
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