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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
室温,12个月
- 库存:
现货
- 供应商:
联硕生物
- 规格:
100ml
用途:IEF蛋白电泳胶的染色
注意事项:主要由R-250、甲醇、乙酸、硫酸铜等组成。使用时100:1混合使用。
储运及效期(运输/储存/有效期):室温,12个月
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文献和实验,调pH8.3后,用重蒸水定容至1000ml,置试剂瓶中,4℃贮存,临用前稀释10倍。 (3)0.1%溴酚蓝指示剂 (4)染色液 染色液种类较多,染色方法也不完全相同。本实验采用0.05%考马斯亮蓝R250染色液中,含20%磺基水杨酸,其优点是染色、固定同时进行,背景易脱色。0.5%考马斯亮蓝R250的20%磺基水杨酸染色液:考马斯亮蓝0.05g,磺基水杨酸20g,加蒸馏水至100ml,过滤后置试剂瓶内保存。 (5)脱色液 7%乙酸溶液 (6)保存
(1)丙烯酰胺液溶 称取丙烯酰胺22.2g与双丙烯酰胺0.6g,溶于100ml水中,贮于褐色瓶中低温保存。(2) 凝胶缓冲液 称取磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O)8.82g 、磷酸氢二钠(Na2HPO4 ·12H2O)51.55g与十二烷基硫酸钠2.0g,加水至1000ml(若有沉淀析出,可加温至37℃溶解)。(3)电泳缓冲液 将凝胶缓冲液稀释1倍。(4)染色液 称取25mg考马斯亮蓝R,溶于57%乙醇与9.2%醋酸混合液100ml中。(5)脱色液 取无水乙醇75ml,加冰醋酸50ml,用水
制成50% 悬液。 每 1mL 细胞裂解液上清加入 100 µL Agarose protein A+G 珠子,4℃ 振荡 10 min,进行预清除。 4℃,10000 rpm 离心10 min移去 Agarose protein A+G 珠子,转移上清至一新离心管中。 用 Bradford 法(考马斯亮蓝染色法)测定上清蛋白浓度。(应至少将细胞裂解液作 1:10 稀释后再测定,这是因为存在于裂解液中的去污剂成分会干扰考马斯亮蓝的作用)。 根据所测得的细胞裂解液蛋白浓度,用 PBS
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