71514 Script III RT Kit With g

Script III RT Kit With gDNA Eraser

（Perfect for qPCR）

目录号:71514

产品内容

保存条件

-20℃保存，有效期 12 个月。

产品简介

Script III RT Kit With gDNA Eraser是一种高效、稳定、快速并可以去除基因组DNA污染的反转录系统。本产品具有强大的基因组清除能力，碰到基因组残留较多的RNA样本时，这款逆转录试剂盒是zui优选择。只需两步操作， 17分钟就可以完成基因组清除和逆转录反应，操作方便快捷，逆转录产物兼容染料法和探针法qPCR，用于检测高拷贝或低拷贝基因。

本品采用第三代高效逆转录酶和热敏型dsDNase，针对qPCR进行特别优化oligo dT和N6随机引物配比，使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始并具有相同的逆转录效率，zui大程度保证了qPCR结果的真实性和可重复性。

其中5x RT MasterMix为一管式逆转录预混液，含有逆转录所需的所有试剂（Script III Hˉ RTase、RNase Inhibitor、Random primers、Oligo dT Primer、dNTP Mixture、RT Buffer）。

注意事项

1． 本产品适用于包含 Ploy (A)结构的真核生物 mRNA 和不包含 Ploy (A)结构的原核生物RNA、真核生物rRNA和tRNA等模板，但不适用于miRNA等小 RNA 模板。

2． 避免 RNase 污染。

3． 为保证反转录成功，建议使用高质量的 RNA 样品。

4． 20μl 逆转录反应体系建议加入不超过 1μg 的 Total RNA。如果目的基因的表达量非常低，最多加入 5μg Total RNA，否则，RNA 量过高，可能会超出后续 qPCR 的线性范围

5． 建议使用 0.2ml RNase-free PCR 管在冰上配制反应液，并用 PCR 扩增仪精准控温。

6． 5x RT MasterMix 和 4x gDNA Eraser Mix 含有高浓度甘油，比较粘稠，容易吸附在管壁和吸头外，导致损失，用前请点甩离心后取用。5x RT MasterMix 和 4x gDNA Eraser Mix 内包含的酶过量，即使每次分别按照 3.8 μl、0.9 μl 使用，也不影响使用效果。

第一连 cDNA 合成 (以 20 μl 反应体系为例)

重要提示：操作前，请将各组分轻弹混匀，点甩离心后置冰上备用。

1． 去除基因组DNA

于冰上，在PCR管中，加入以下组分：

用移液器轻轻吸打混匀，42°C 孵育 2 min，以去除基因组 DNA 污染。

2． 逆转录反应

把步骤1的反应管放在冰上，加入4 μl 5x RT MasterMix，轻柔吸打混匀瞬离，设置反应程序：

① mRNA模板来源于真核细胞(植物、动物)，含有Poly(A)尾结构：42℃孵育15min；

② mRNA模板来源于原核细胞(细菌)、病毒，不含Poly(A)尾结构：25℃孵育10min；42℃孵育15 min。

注意：如果模板具有复杂二级结构或高GC区域，把42°C的孵育温度提升至50°C，有助于提高产量。

3． 终止反应

85°C加热5 sec，失活RTase和gDNA Eraser。

逆转录产物可立即用于qPCR反应，或保存于-20°C，并在半年内使用；长期存放，请分装后存于-70°C。

qPCR

建议取1~2μl cDNA产物原液作为20μl qPCR反应体系的模板。如果基因表达量比较高，请根据实际情况适当稀释cDNA模板后使用。

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