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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
大量
- 供应商:
北京辰辉创聚生物技术有限公司
- 检测范围:
1.2pg/mL -45 pg/mL
- 检测方法:
双抗夹心法
- 应用:
测定人血清、血浆及相关液体样本中肠高糖素(Glicentin)含量。
- 适应物种:
Human
- 规格:
48T/96T

| 产品信息
品名:NebuEasy™ 人肠高糖素(Glicentin) ELISA试剂盒
货号:NBE-236760
品牌:Nebulabio
规格:48T/96T
| 检测原理
| 产品属性
物种:Human
靶点信息:肠高糖素(Glicentin)
检测范围:1.2pg/mL -45 pg/mL
产品应用:NebuEasy™ 人肠高糖素(Glicentin) ELISA试剂盒(产品编号:NBE-236760)可用于测定人血清、血浆及相关液体样本中肠高糖素(Glicentin)含量。
储存条件:4℃保存,有效期见标签
| 操作步骤
1.标准品稀释:
|
标准品编号 |
标准品浓度 |
标准品配置方法 |
|
5号标准品 |
40pg/mL |
将150μl的原始标准品加入150μl标准品稀释液 |
|
4号标准品 |
20pg/mL |
将150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 |
|
3号标准品 |
10pg/mL |
将150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 |
|
2号标准品 |
5pg/mL |
将150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 |
|
1号标准品 |
2.5pg/mL |
将150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 |
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同步骤3。
8.洗涤:操作同步骤5。
9.显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.
10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
| 计算结果
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
| 注意事项
1)标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。另外,本试剂盒不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
2)试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡1小时后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
3)浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
4)各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
5)请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
6)封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
7)底物请避光保存。
8)严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准
9)所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
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文献和实验进行试验。 国外很多ELISA试剂采用碱性磷酸酶(AP)作为标记酶。常用的AP有两个来源,分别从大肠杆菌和小牛肠膜中提取。不同来源的酶生化特性特性略不相同,从大肠杆菌中提取的AP分子量为80000,酶作用的最适合pH为8.0;用小牛肠膜中提取的AP分子量为100000,最适pH为9.6.在ELISA中,AP系统的敏感度一般高于HRP系统,空白值也较低,但AP价格昂贵,制备结合物所得率也较HRP低。 (二) 抗原和抗体 制备结合物时所用抗体一般 均为纯度较高的IgG,以免在与酶联结时其他杂蛋白
、反应温度和时间等的影响,因此必须在实际测定条件下进 行"滴配"选择能达到高敏感度的最大稀释度作为试剂盒中的工作浓度。 3.2.4 结合物的保存 酶标抗体中的酶和抗体均为生物活性物质,保存不当,极易失活。高浓度的结合物较 为稳定,冰冻干燥后可在普通冰箱中保存一年左右,但冻干过程中引起活力的减低,而且 使用时需经复溶,颇为不便。结合物溶液中加入等体积的甘油可在低温冰箱或普通冰箱的 冰格中较长时间保存。早期的ELISA试剂盒中的结合物一般均按以上两种形式供应,配
很多ELISA试剂采用碱性磷酸酶(AP)作为标记酶。常用的AP有两个来源,分别从大肠杆菌和小牛肠膜中提取。不同来源的酶生化特性特性略不相同,从大肠杆菌中提取的AP分子量为80000,酶作用的最适合pH为8.0;用小牛肠膜中提取的AP分子量为100000,最适pH为9.6。在ELISA中,AP系统的敏感度一般高于HRP系统,空白值也较低,但AP价格昂贵,制备结合物所得率也较HRP低。3.2.2 抗原和抗体 制备结合物时所用抗体一般 均为纯度较高的IgG,以免在与酶联结时其他杂蛋白的干扰。最好
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