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99
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爱必信(上海)生物科技有限公司
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1g
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文献和实验)1%BSA 37℃,30min 。 (16)第一抗体,4℃孵育16~24h。 (17)PBS冲洗4×5min。 (18)第二抗体37℃,1h。 (19)PBS冲洗3×5min。 (20)兔PAp 37℃,1h 。 (21)PBS冲洗3×5min。 (22)DAB显色液5~10min(DAB显色液:0.05%DAB + 0.03% H 2 O 2 PBS液配)。
,调pH8.3后,用重蒸水定容至1000ml,置试剂瓶中,4℃贮存,临用前稀释10倍。 (3)0.1%溴酚蓝指示剂 (4)染色液 染色液种类较多,染色方法也不完全相同。本实验采用0.05%考马斯亮蓝R250染色液中,含20%磺基水杨酸,其优点是染色、固定同时进行,背景易脱色。0.5%考马斯亮蓝R250的20%磺基水杨酸染色液:考马斯亮蓝0.05g,磺基水杨酸20g,加蒸馏水至100ml,过滤后置试剂瓶内保存。 (5)脱色液 7%乙酸溶液 (6)保存
非放射性核酸探针标记物的设计和125I与DNA探针的化学结合。能与核酸结合的单一原子有银、溴和碘等,这些元素可与嘧啶(胸腺嘧啶除外)环的C-5位或嘌呤环的C-8位反应而不影响氢键的形成。溴亦可与胸腺嘧啶的C-6位结合。而胞嘧啶的C-4和腺嘌呤的N-6就不能被修饰,否则会影响碱基配对,尽管C的N-4位和A的N-6位参与了氢键形成,但它们也是标记位点。这是因为标记的探针每1kb只掺入10~30个修饰碱基,即仅4%~12%的单个碱基被修饰的类似物取代了。尽管掺入位点处的碱基配对较弱或不存在,但对整个杂交
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