4-乙酰基-1H-吲唑

制滴菌素A对小鼠克隆胚胎的染色体重建、DNA复制及转录活性的影响

μL转录液的电促细胞融合仪的两电极中间；采用250V/cm，80 μs，2次的参数，对胚胎进行透化，(每次透化间隔为2min)。胚胎透化后2min移入CZB中培养1h然后再移入上述转录液中。最后胚胎用4%多聚甲醛中固定，用间接免疫荧光观察转录物种掺入的BrUTP的含量。在阴性对照组的EP液、转录液、KSOM液中加入5 μg/mL 鹅膏菌素(RNA聚合酶 II和III的抑制剂)。 6. 免疫荧光显微镜检查 本次试验中使用的抗体是兔抗组蛋白H3 丝氨酸10磷酸

　DNA及寡核苷酸探针在原位杂交组织化学中的应用

/μl,杂交液2～3μl/每cm 2 盖片，每张盖片大约1.8cm 2 ，约需10μl杂交液。有实验室报告，如每张盖片（温度为室温）加入杂交液将会降低杂交温度所需要的37℃，因此，建议对盖片应用前在37℃进行预热。 （3）用免疫细胞化学或组织化学方法显示荧光标记。自80年代以来，荧光素标记检测系统日益增加。包括：①生物素标记探针与荧光素标记的抗生物素（avidin）或抗生物素抗体。②氨乙酰基荧光（aminoacetylfluroence

　原位杂交免疫细胞化学技术的未来与展望

mm的孔）的凹孔内，加热105℃90s，然后以2%多聚甲醛-磷酸缓冲液，pH7.4，固定1h，PBS漂洗3min×3。如用生物素标记核酸探针，应用0.3%的H 2 O 2 孵育37℃过夜，然后以蛋白酶K溶液（5μg/ml PBS）55℃孵育2h（孵育时间应根据细胞的种类而定），将孵育的载片置于96℃热板上2min，最终以蒸馏水漂洗，空气干燥。在溶液中按PCR技术的需要加入20PM一对应的引物（Primer），15μg PCR混合液含10μmol/l dATP