(E)-2-((二甲基氨基)亚甲基)环戊酮

组化染色背景高？没信号？一篇文章带你快速掌握免疫组化！

染色通常需要样品制备、抗原修复、封闭、目的抗原检测等操作。IHC 实验成功的关键在于稳定、优化且可重复的染色方案。下图为 IHC 的实验操作步骤。 图 4 IHC操作步骤 免疫组化样本固定多使用甲醛进行固定，通过形成亚甲基桥而将蛋白交联起来，掩盖掉抗原位点，从而影响抗原-抗体的结合。抗原修复则会破坏这些亚甲基桥，暴露出抗原位点，使抗体能够与之结合。用于抗原修复的两种方法分别为热诱导表位修复法和酶修复法。 表 3 抗原修复方式分类 图 5 免疫组化实验检测 Phospho-Akt 表达 注

聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PAGE）分离血清蛋白质（核黄素-TEMED聚合系统）（图）

双丙烯酰胺的浓度。对于这个要求，Richards E.C.等人提出了如下一个经验公式：                         C=6.5-0.3T  浓度在5～20%范围内，可以应用这个式子容易地计算凝胶的组成用量。式中C可有1%的变化。 对于人血清蛋白质的分离，Brackenridge C.J.等人，推导出了下面这个经验式，用以计算最适的凝胶浓度，以便获得最好的分辨率。                        B=0.201-0.0112T 这里，B代表亚甲基双丙烯

分子信标技术及其应用研究进展

）茎杆序列中G和C的含量不能太高5’-端的第一个碱基最好不要选择G由于被测对象DNA或RNA是大分子，存在扭曲现象，因此要选择被测对象的外围碱基序列，即容易接近的那段序列来设计信标。荧光猝灭依赖的是能量共振转移，而转移的效率与荧光基团发射光谱同猝灭基团激发光谱的完全重叠有关。为了荧光能有效猝灭，荧光基团的发射光谱应完全覆盖猝灭基团激发光谱。符合此要求且较常用的荧光剂-淬灭剂有：EDANS（5′- (2′-氨乙基氨基奈-1-磺酸)和DABCYL（4′-(4′-二甲基氨基叠氮苯) 苯甲酸 6-荧